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本发明公开了一种棘白菌素B合成培养基及制备棘白菌素B的应用,所述培养基质量浓度组成为:油酸甲酯20-100g/L,淀粉10-60g/L,油酸10-30g/L,组氨酸10-30g/L,谷氨酸5-20g/L,L-苏氨酸2-5g/L,L-鸟氨酸盐酸盐5-8g/L,硝酸钾5-15g/L,K-2HPO-4·3H-2O 5-20g/L,MgSO-4·7H-2O 0.1-1g/L,MnSO-4·H-2O 0.1-0.5g/L,FeSO-4·7H-2O 0.01-0.1g/L,CaCl-20.1-0.5g/L,CuSO-4·5H-2O 0.5-1g/L,溶剂为水,pH6.5-7.0。本发明棘白菌素B产量达到了1950mg/L。