[00105176]一种isPLA-Seq的高通量检测蛋白质相互作用的方法和试剂盒及其应用
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技术详细介绍
本发明提供了体外筛选或检测蛋白间相互作用的方法和检测试剂盒及其应用。所述方法包括：1)构建含有第一标签的cDNA文库的第一重组表达载体；2)构建可表达含有第二标签的待研究蛋白的第二重组表达载体；3)将第一重组表达载体和第二重组表达载体共转染细胞，培养一段时间后将细胞进行固定；4)将步骤3)制备的固定后的细胞进行原位邻近连接实验(in situ proximity ligationassay,isPLA),然后分选isPLA阳性细胞；5)将步骤4)获得的isPLA阳性细胞裂解后作为模板，根据第一重组表达载体的外源基因插入位点的上下游序列设计引物进行PCR扩增，然后将PCR产物进行测序，依据序列得出相互作用蛋白的氨基酸序列。
