[00107983]结核分枝杆菌融合蛋白 Mtb10.4-Hsp16.3 的构建.表达和纯化方法及其应用
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技术详细介绍
本发明选择结核杆菌生长期和休眠期主要的保护性抗原Mtb10.4和Hsp16.3， 构建融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3（MH）。在大肠杆菌中表达纯化该蛋白，将该蛋 白和佐剂混合构建亚单位疫苗，分别于BCG初免后12、14周加强免疫C57BL/6小鼠 两次，最后一次免疫6周后检测细胞免疫反应，最后一次免疫后10周进行结核菌 毒株H37Rv攻击。结果：该融合蛋白能在大肠杆菌中稳定大量表达，经离子交换 层析、凝胶过滤层析和疏水层析三步纯化得到纯度较高的蛋白；构建的亚单位疫 苗免疫动物可产生针对结核杆菌特定抗原（Mtb10.4和Hsp16.3）的特异性细胞和 体液免疫应答，具有较强的免疫原性；毒株攻击后，小鼠肺脏结核菌数量明显少 于PBS组和BCG组。结论：本发明成功构建、表达和纯化不带任何标签的融合蛋白 MH,此蛋白可诱导较强的细胞和体液免疫应答并具有一定的动物保护效应，有望 成为临床结核病预防和治疗的候选疫苗。
