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本发明公开了一种能够减少信息丢失、提高可靠性的自转录DNA序列的检测方法与应用和真核调控元件的鉴定方法及其应用。该检测方法包括以下步骤:构建报告载体,报告载体包括依次设置的启动子、ORF序列和插入的DNA片段;将报告载体转录为mRNA;使用反转录引物对mRNA进行反转录以获得cDNA;反转录引物包括:5′?Z?Tm?Xn?3′。本发明采用新的反转录引物对转录过程中得到的mRNA进行反转录,与现有技术相比,其对于将polyA序列加到插入片段自带pA位点的mRNA也能够实现良好的转录,确保在整个检测过程中插入片段信息的完整传递,避免信息的大量丢失,从而提高检测结果的可靠性,有效克服漏检现象的发生。