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本发明提供了一种开发恒河猴T细胞免疫组库的引物组、高通量测序方法及应用。本发明通过针对恒河猴TCR的可变区V区(variable)设置了26条上游引物序列,针对TCR的连接区(joining)J区设置了13条下游引物序列,通过多重PCR扩增出外周血或者其他免疫组织中高达107左右数量级的TCR序列,制备高通量测序文库并测序,通过生物信息学对恒河猴TCR基因免疫组库进行了全面分析。本发明提供的技术方案对构建恒河猴分析模型意义重大,有利于促进恒河猴模型在研究自体免疫系统疾病和传染病中的应用,也有利于人类对T细胞介导的疾病有更深入和广泛的认识。