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本发明提供了一种治疗性的人Plk1蛋白单克隆抗体及其制备方法,首先体外表达纯化了人Plk1蛋白,以重组Plk1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合;通过间接ELISA法筛选分泌特异性McAb的杂交瘤细胞;用杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水, 再用蛋白G亲和层析法纯化抗体,最终获得5株治疗性的人Plk1蛋白单克隆抗体。相比现有技术,本发明的制备工艺简单、易行,试剂易得,一次性可提取5株针对癌症治疗靶点:人Plk1蛋白的鼠单克隆抗体,它们通过调控蛋白的活性调控细胞周期;可以通过进一步的抗体人源化改造使其成为具有治疗功能的抗癌药物前体。