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本发明提供了一种探针及其合成方法和应用,所述方法包括以下步骤:(1)化合物A脱Boc后与化合物B反应得到化合物C;(2)将步骤(1)所述化合物C与N?羟基琥珀酰亚胺缩合得到探针骨架;(3)将诱饵蛋白与得到的探针骨架混合后连接,再加入甘氨酸溶液终止反应,过滤后得到所述探针。本发明的合成方法操作简便、成本低廉、环境友好,制备得到的探针采用SH2结构域作为诱饵蛋白,有利于进行蛋白质间弱相互作用和瞬时相互作用分析,尤其有利于进行SH2结构域和酪氨酸磷酸化蛋白的富集和鉴定,显著提高了人或动物组织样本及细胞膜附近目标蛋白及其复合物的富集和鉴定能力,并降低了其他非特异性吸附蛋白背景干扰。