[00111375]清化瘀毒方对酒精性肝纤维化大鼠TLRs/NF-kB信号通路的研究

课题组在完成以往宁波市自然科学基金课题过程中,对“清化瘀毒方”内涵做了新的诠释。研究发现：该方能有效的抗肝纤维化,调节肝纤维化程度及释放相关因子,改善肝功能抑制相关蛋白的表达,由此从不同层次阐明了该方治疗酒精性肝纤维化的科学内涵。前期研究更多侧重于中药复方治疗肝纤维化的临床研究,在其治疗过程中相关效应机制方面还存在太多未知,这些亟待解答的问题直接左右了临床上如何正确认识及应用,成为治疗用药的阻碍。结合前期相关研究结果,从细胞免疫学及分子信号通路角度探索酒精性肝纤维化的发生机制,进一步揭示中药组方在早期抗肝纤维化的作用途径及靶向。实验研究所应用的PCR技术、流式细胞技术、western-blot蛋白印迹技术、免疫组化技术等分子生物学方法均已熟练掌握。其先进性与创新性在于：1.从细胞免疫学角度探求中药复方清化瘀毒方的作用机制。2.观察酒精性肝病上皮细胞中Toll 样受体（Toll-like receptors,TLRs）TLR4在精性肝病细胞组织中的表达。3.通过清化瘀毒方对精性肝病大鼠TLRs/NF-κB 信号通路进行干预,观察 TLRs/NF-κB 信号通路在治疗前后以及对信号通路下游相关因子的影响。4. 揭示酒精性肝纤维化模型中TLRs/NF-κB信号通路蛋白的表达及活化情况,从分子信号角度探讨酒精性肝纤维化的发病机制,为研发新的抗纤维化药物提供新的思路。 本研究以精性肝病大鼠模型为研究对象,观察Toll 样受体（Toll-like receptors,TLRs）TLR4在精性肝病肝纤维化细胞组织中的表达。同时,利用中药复方清化瘀毒方对精性肝病TLRs/NF-κB 信号通路进行干预,观察 TLRs/NF-κB 信号通路对下游相关因子的影响。探讨 TLR4的表达及其介导的NF-κB信号通路在精性肝病发生及进展中的作用机制,为治疗预防精性肝病建立新的、有效的临床免疫治疗提供理论和实验依据。其中主要指标研究方法包括： （1）动物的一般情况,包括体重（每周末称重一次）、精神状态、皮毛光泽度、食量、大小便等。 （2）免疫荧光法检测 TLR4 治疗干预后的表达。 （3）ELISA方法观察治疗干预后各组IL-1β、IL-6和TNF-α的表达。 （3）Western-blot方法检测各组NF-κB与TLR4/MyD88蛋白表达。 （4）运用RT-PCR的方法检测NF-κB表达的影响。 项目已完成的内容和实际达到的指标 1、本研究结果显示,模型组的TLR4荧光强度增强,提示TLR4造模后表达增强。TLR4-MyD88-NF-κB信号通路作为参与固有免疫的主要受体进而激活炎性反应是关联酒精性肝纤维化的重要通路之一,它的激活可导致下游炎症因子的释放,诱导产生白细胞介素-1（interleukin-1,IL-1）、IL-6 及肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）。TLR4是各种肝脏疾病发生肝脏炎症的关键介质。清化瘀毒方干预治疗后TLR4明显降低,清化瘀毒方可能通过降低TLR4的表达,从而与其抑制炎性细胞因子分泌、减轻炎症反应有关。 2、发表具有较高学术水平的论文3篇。 3、培养硕士研究生2名。 4、参加省级学术交流,研究结果在学术会议进行交流汇报,荣获浙江省中医药学会2018年脾胃病分会学术年会优秀论文3等奖。