[00111409]短管兔儿草总黄酮对拟AD模型小鼠NF-KB信号通路相关蛋白表达的影响

一、课题来源与背景：甘肃省科学技术厅2015年资助的甘肃省自然科学基金项目,项目编号：1506RJZA42,资助经费：3万元。 二、技术原理及性能指标：阿尔茨海默病（Alzheimer disease, AD）是老年人最为常见的一种中枢神经系统退行性疾病,已成为当今社会严重威胁老年人生命的杀手疾病之一。到目前为止,AD的发病机制仍不明确,形成了各种假说：免疫炎症假说、自由基损伤假说、β-淀粉样蛋白假说、中枢神经递质假说等,这些假说为人们认识AD提供了多角度视点,同时也造成了诸多困惑。因此,研究AD的发病机理,研发安全有效的药物,不仅有其医学价值,更具重要的社会意义。 按照任务书完成了以下主要技术经济指标 1.短管兔耳草总黄酮的提取采用回流提取法提取。 2.动物模型的建立及分组： 以快速老化小鼠（SAMP8）为动物模型。整个实验小鼠共分7个组（♂）：快速衰老小鼠SAMP8（8月龄）70只,随机分为5组,每组10只,即模型组、短管兔耳草总黄酮高剂量组、中剂量组、低剂量组;盐酸多奈哌齐阳性对照组。SAMR1（8月龄）小鼠10只,作为正常老化对照组;SAMP8青年对照（2月龄）小鼠10只,作为青年对照组。其中,阳性对照组盐酸多奈哌齐混悬液浓度为0.65生药g/kg,模型组、SAMP8青年对照组（2月龄）、SAMR1正常老化对照组（8月龄） 以等量溶媒（能溶解短管兔耳草总黄酮的溶剂）灌胃。 3.检测指标： ①光镜下对海马组织细胞进行一般形态学观察。 ②检测海马中超氧化物歧化酶（SOD）含量。 ③检测海马中丙二醛（MDA）水平。 ④检测海马中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的变化。 ⑤检测海马中IL-1、IL-6、TNF-α含量。 ⑥检测大脑组织NF-κBP65mRNA、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA的表达。 ⑦检测 NF-κB转录因子、IKB-α的表达水平。 ⑧检测小鼠行为学指标。 三、技术的创造性与先进性 目前治疗AD的药物主要是胆碱脂酶抑制剂和N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂。然而AD是一种 ”多因异质性疾病“,上述药物在一定程度上改善了不同阶段AD病人的认知和记忆能力,缓解痴呆症状,但尚不能阻止AD的神经病理发展进程,且毒副作用较大,本课题以”氧化应激、免疫炎症假说“为立论依据,所用干预药物为天然药用植物短管兔耳草的提取物-总黄酮,黄酮类化合物有抗炎、抗氧化、调节免疫、抗衰老作用,通过观察该药物对小鼠行为学改变、大脑皮层及海马组织细胞病理形态、抗氧化能力、炎性因子含量和mRNA表达以及相关蛋白通路的影响,为治疗AD提供可靠的实验依据,同时推动藏药的开发利用。研究处于国内领先水平。 四、技术的成熟程度,适用范围和安全性 中医学、藏医学以及各种少数民族使用的民间医药都对AD的治疗起到重要作用,其中包括运用针灸技术,健脑生髓的方法,化痰醒脑的方法,补肾益脾的方法等等。在众多的祖国医药治疗AD的方法中,中药材中的黄酮类化合物,对于抗衰老,抗炎等作用明确,能够很好的改善由于增龄引起的各类疾病。中药材安全性高,毒副作用小,这在治疗AD的过程中极为重要。藏药同时作为一种大自然中的珍贵药材,自古便有对心、脑、肾等重要器官疾病的重要医治作用,短管兔耳草是一种传统的常用藏药,藏药名为”洪连“。它的化学成分主要有挥发油类、黄酮类、苯丙素苷类、脂溶性化学成分、环烯醚萜苷类等。近年来关于短管兔耳草的研究表明,短管兔耳草总黄酮是该植物中一类重要的有效成分,通过抗氧化、清除自由基、调节免疫功能等作用机制发挥清热解毒、利尿消肿、抗炎止痛之功效。本实验已经获取了短管兔耳草总黄酮的提取的方法：采用回流提取法提取短管兔耳草总黄酮,技术路线成熟,提取纯度高。将现代科技手段与藏药中的有效成分相结合研究其对阿尔茨海默病是否起到一定的治疗作用,将无疑是推动藏药开发利用的一个必要途径,值得我们关注并研究。 五、应用情况及存在的问题 1.应用情况 目前,西药治疗阿尔茨海默症主要为抗氧化剂、益智药、脑代谢激活药、抗炎药以及精神类药物。这些西药虽然在AD的治疗方面有很好的疗效,但是相应的副作用也比较突出,因此,从多种角度探究AD治疗的方法很有必要。 本课题使用短管兔耳草总黄酮对拟AD小鼠进行干预,从”氧化应激、免疫炎症假说“两方面研究、探讨AD的发病机制。天然药材具有毒副作用小、安全性高的特点,这在治疗AD的过程中极为重要,同时也能促进藏药的开发利用,促进地方经济发展。 2.存在的问题 本研究仅从短管兔耳草总黄酮对拟 AD 模型小鼠的氧化应激与炎症作用干预情况进行研究探讨,获得了一些研究结果。但仍有许多方面问题需要进一步研究： ①短管兔耳草总黄酮给药的最佳剂量需更准确的研究。 ②本课题只做了短管兔儿草总黄酮对快速老化小鼠（SAMP8）小鼠的影响,研究AD的各种模型都存在一些不足,有必要进一步研究AD模型。 ③进一步研究短管兔耳草总黄酮给药后,小鼠脑内Aβ淀粉酶沉积是否减少,小胶质细胞激活状态是否有所改变及与自噬的关系。 ④进一步论证短管兔耳草总黄酮有效作用部位。 六、历年获奖情况：无