[00111478]ERK1/2通路在远端肢体缺血预处理对氯胺酮麻醉后脑发育期神经凋亡中的作用及机制

远端肢体缺血预处理（RIPC）指通过对一个组织或器官行短暂的缺血再灌注后可加强远隔器官或组织对随后损伤的耐受性。RIPC可触发远端器官（如肾脏,心脏和大脑）中的内源性保护通路,并可通过重复充气和肢体上的血压袖带放气在临床中轻松实施。在课题组进行的动物实验中,已证实RIPC对于氯胺酮造成的神经损伤也具有保护作用。 因此RIPC 可能是一种新的预防和缓解全麻药发育期神经毒性的方法。由于其是一种内源性保护方法,简单易行,便于控制,可应用于临床。 （1）主要研究内容。 第一部分：RIPC 对氯胺酮麻醉引起的发育期神经细胞凋亡、神经炎性因子和认知功能的影响; 第二部分：RIPC对氯胺酮麻醉引起的发育期大脑ERK1/2信号通路以及NF-κB的影响。 （2）取得的主要研究进展、重要结果、关键数据等及其科学意义或应用前景。 1. 第一部分实验内容共分为四个组：对照组（C组）、远端肢体缺血预处理组（RIPC组）、氯胺酮组（KTM组）、远端肢体缺血预处理+氯胺酮组（RIPC+KTM组）。 2. HE和尼氏染色结果显示：氯胺酮末次注射后12 h,与C组比较,RIPC组神经细胞形态及数量无明显改变（P＞0.05）;KTM组和RIPC+KTM组海马CA1区细胞极性差,排列稀疏,神经细胞数量减少（P＜0.01）。与KTM组比较,RIPC+KTM组神经细胞极性较好,神经细胞数量增多（P＜0.01）。氯胺酮末次注射后的第7天和14天,各组神经细胞形态及数量无明显改变（P＞0.05）。 3. 电镜结果显示：氯胺酮末次注射后12 h,与C组比较,RIPC组内质网和线粒体稍肿胀,其余结构无明显改变;KTM组神经细胞核膜皱缩凹陷,胞浆细胞器稀疏,结构异常;RIPC+KTM组神经细胞核膜清晰完整,胞浆细胞器较致密,但细胞器结构存在不同程度损伤。与KTM组比较,RIPC+KTM组神经细胞核膜清晰完整,胞浆细胞器较致密,细胞器结构损伤稍轻;氯胺酮末次注射后的第7天,C组与RIPC组神经元细胞核膜完整清晰,常染色质分布均匀,存在大量内质网,线粒体数量多。与C组相比,KTM组和RIPC + KTM组核膜完整清晰,但内质网分布减少,溶酶体和自噬体增多;与KTM组相比,RIPC + KTM组核膜完整清晰,线粒体嵴完整。氯胺酮末次注射后14天电镜标本样本已制作完成,尚未镜下拍摄。 4. 免疫组化和Western-blot结果显示：氯胺酮末次注射后12 h,与C组比较,RIPC组大脑海马和皮层神经细胞Bax和Bcl-2的表达以及Bax/Bcl-2比值无统计学意义（P＞0.05）;KTM组和RIPC+KTM组大脑海马和皮层细胞Bax表达增多而Bcl-2的表达降低,Bax/Bcl-2比值升高（P＜0.05）。与KTM组比较,RIPC+KTM组大脑海马和皮层神经细胞Bax表达减少而Bcl-2的表达增多,Bax/Bcl-2比值降低（P＜0.05）。氯胺酮末次注射后7天和14天,各组Bax和Bcl-2的表达结果初步提示无统计学差异,正在统计中。 5. TUNEL实验结果显示：氯胺酮末次注射后12 h,与C组比较,RIPC组大脑海马和皮层神经细胞凋亡百分比无统计学意义（P＞0.05）,KTM组与RIPC+KTM组大脑海马和皮层神经细胞凋亡数量增加（P＜0.05）,与KTM组比较,RIPC+KTM组大脑海马和皮层凋亡细胞百分比降低（P＞0.05）。氯胺酮末次注射后7天和14天,各组凋亡细胞结果初步提示无统计学差异,正在统计中。 6. 水迷宫实验结果显示：大鼠2月龄时进行水迷宫测试,在训练的第6天,与C组比较,RIPC组逃避潜伏期和游泳距离无统计学意义（P＞0.05）,KTM组与RIPC+KTM组逃避潜伏期和游泳距离增加（P＜0.05）,与KTM组比较,RIPC+KTM组逃避潜伏期和游泳距离减少（P＜0.05）。在第7天撤掉平台测试到达平台次数,与C组比较,RIPC组到达平台次数无统计学意义（P＞0.05）,KTM组与RIPC+KTM组到达平台次数减少（P＜0.05）,与KTM组比较,RIPC+KTM组到达平台次数增加（P＜0.05）。 7. ELISA结果初步提示：氯胺酮末次注射后12 h,与C组相比,RIPC组血清的TNF-α、 IL-6、 IL-1β的表达水平无差异（P＞0.05）,KTM组和RIPC+KTM组血清的TNF-α、 IL-6、 IL-1β的表达水平均升高（P＜0.01）;与KTM组相比,RIPC+KTM组血清的TNF-α、 IL-6、 IL-1β的表达水平减少（P＜0.01）。氯胺酮末次注射后的第7天和第14天,各组血清的TNF-α、 IL-6、 IL-1β的表达水平无差异（P＞0.05）。