[00111633]果汁中耐热菌ELISA快速检测新技术研究及其试剂盒创制

本项目研究内容属于食品科学技术领域,特别是食品质量与安全检测研究领域。项目组针对果汁加工领域存在的耐热菌,即酸土环脂芽孢杆菌（Alicyclobacillus acidoterrestris）检测控制的技术瓶颈和无快速检测方法的技术难题,应用食品检验学、微生物学、免疫学、酶联免疫分析、单克隆抗体技术等交叉学科理论与方法,通过七年攻关研究,在国际上首创研究建立了果汁中耐热菌ELISA快速检测新技术,并创制了快速检测试剂盒。 主要研究内容包括,首次以耐热菌免疫家兔及大鼠获得兔源及鼠源多克隆抗体,并首次通过建立杂交瘤细胞株,制备了相应的耐热菌单克隆抗体,进行了抗体纯化和鉴定。以聚苯乙烯微孔反应板为固相包被抗原或抗体,首先建立了耐热菌ID-ELISA快速检测技术,在此基础上,以酶标SPA代替ID-ELISA中的酶标羊抗兔IgG,改进并建立了耐热菌SPA-ELISA。在此基础上,进一步以耐热菌兔抗为捕获抗体,鼠抗为检测抗体,HRP标记的抗体为酶标二抗,首次成功建立了更优越的耐热菌DAS-ELISA,并研制出了相应的快速检测试剂盒,从方法学角度,进行了一系列方法评价试验、参数优化,以及试样、模拟样和实际样品验证及企业实际应用,证明所建立的耐热菌ELISA检测方法及其试剂盒达到快速、特异、准确、灵敏、方便、实用。 技术性能指标： ①检测灵敏度：满足果汁中的耐热菌不超过1个/10mL的国际标准。 ②特异性：与果汁中种常见的食品污染菌无交叉反应,特异性良好。 ③检测时间：18小时内完成。 ④检测通量：一次可检测96个样品。 ⑤精密度：批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%,精密度良好。 ⑥准确性：与国际通用传统检测方法KFL检测结果符合率100%。 ⑦方法特点：快速、准确、灵敏、特异、方便、实用。 2012年通过省级科技成果鉴定,鉴定结论为“达到国际领先水平”。2011年以来,该技术成果分别在西安市农产品质量检验监测中心、阿果安娜果汁（咸阳）有限公司、陕西海升果业集团股份有限公司、天人果汁集团股份有限公司进行了应用,效果良好,效益显著,对保障果汁食品质量与安全,推动行业科技进步具有重大意义。 项目发表学术论文13篇（其中SCI期刊3篇,权威期刊3篇,核心期刊4篇）,获得授权国家发明专利5件,申请发明专利1件。研究成果受到国内外广泛关注,美国一家国际知名检验及诊断试剂公司和国内多家生物试剂公司提出技术转化需求。