[00111660]精准腹腔热灌注化疗上调LncRNA-RP11-356I2.2靶向KLF17抑制胃癌侵袭转移的分子机制

实施方法及路线： （1）胃癌血清中 HIPEC 前后差异表达 LncRNA 的筛选、确定和再验证：利用生物信息学、多因素统计分析等对 HIPEC 前后差异表达LncRNA 及 mRNA 进行聚类分析及 GO、pathway 分析,确定参与胃癌 HIPEC 发生发展的关键性 LncRNA 及 mRNA。应用 qRT-PCR 技术对筛选的关键性 LncRNA 及 mRNA 进行再验证,确认 RP11-356I2.2 在 HIPEC 后明显上调并高达 12 倍以上。 （2）检测 HIPEC 后 RP11-356I2.2 及其 KLF17 在胃癌细胞株中的表达,并探讨 RP11-356I2.2 调控 KLF17 的分子机制：检测 RP11356I2.2 对 KLF17 mRNA 的 3’-UTR 荧光素酶活性的影响,探讨 RP11-356I2.2 对 KLF17 mRNA 的 3’-UTR 的结合位点及序列。检测胃癌及癌旁组织中RP11-356I2.2 和 KLF17 mRNA 及蛋白的表达水平,并分析其相关性。将 RP11-356I2.2 过表达和 anta- RP11-356I2.2 抑制表达后检测胃癌细胞株中 KLF17mRNA 及蛋白表达变化。 （3） 体内外实验验证 RP11-356I2.2 具有抑制胃癌细胞侵袭转移的能力：以 RP11-356I2.2 过表达及 anta- RP11-356I2.2 细胞为模型,通过 Live cell image,研究 RP11-356I2.2 抑制细胞迁移能力。采用上皮细胞三维培养技术（3D-Matrigel Culture）,模拟癌细胞在体内微环境生长条件,研究 RP11-356I2.2 抑制胃癌细胞侵袭转移能力;采用裸鼠动物模型,上调/下调 RP11-356I2.2,检测裸鼠的淋巴结转移、肺、肝肿瘤转移灶并计算原发灶和转移灶的体积变化。 （4） KLF17 抑制 EMT 相关基因（E-cadherin、β-Catenin、Vimentin、Fibronectin）和蛋白的表达：上调/下调 KLF17 的表达,检测胃癌细胞株、裸鼠动物模型肿瘤组织中 EMT 相关基因mRNA 及蛋白的表达变化。通过软件分析、免疫荧光染色检测 EMT 相关基因 3’-UTR 荧光素酶报告基因活性。检测胃癌及癌旁组织中 KLF17 和 EMT 相关基因 mRNA 及蛋白的表达水平,并分析其相关性。 （5） 胃癌临床标本中分析 HIPEC 后 RP11-356I2.2、KLF17、EMT 相关基因表达水平及 KLF17 高表达和低表达 HIPEC 病人远期随访：在体外和动物模型实验有效性的基础上,进一步进行临床实验。对临床 HIPEC 前后胃癌患者血清进行回顾性和前瞻性研究,分析 RP11-356I2.2、KLF17、EMT 相关基因之间的相关性,观察远期无进展生存率（DFS）和总生存率（OS）以及分析 HIPEC、RP11-356I2.2、KLF17 对胃癌临床治疗和预后的意义。 基于以上方法及路线本项目通过胃癌血清HIPEC（精准腹腔热灌注化疗）前后差异表达LncRNA的筛选验证,并进行体内外系统研究HIPEC后RP11-356I2.2上调KLF17阻断EMT的分子机制;验证KLF17抑制EMT相关基因和蛋白的表达;通过胃癌临床标本中分析HIPEC后相关基因表达水平及病人远期随访。确立了RP11-356I2.2在HIPEC后明显上调,并作为抑制胃癌侵袭转移的新靶点,为HIPEC更好应用于临床提供更充分的理论依据;在SCI收录杂志发表论著2篇。