[00111666]梓醇改善AD大鼠学习记忆的胆碱能神经机制研究

《梓醇改善AD大鼠学习记忆的胆碱能神经机制研究》课题在衰老和Aβ25-35损伤PC12细胞模型研究梓醇对胆碱能神经标志物的影响,利用聚集态Aβ25-35加IBO混合液一次性脑内定位注射制作AD动物模型,免疫组化观察海马ChAT阳性神经元数目,脑匀浆放射免疫法测定大鼠大脑ACh含量、放射酶分析测定ChAT活性、放射配基结合分析测定M受体含量、RT-PCR测受体mRNA变化、电镜观察脑神经细胞超微结构等。同时在正常和Aβ损伤模型原代培养神经元研究梓醇的作用机制,放免（RIA）测定细胞ACh、PKA水平。 本课题预期目标是通过研究证明梓醇对ACh-M受体-受体后信号作用通路的作用,如果早期用药可以干预AD病程,延缓甚至阻止AD疾病的发展。着重于ACh-M受体作用通路的调节过程。 研究过程中直接参与硕士研究生有3名,本科生1名,1名已经作为硕士学位毕业论文顺利通过答辩。实验部分结果已在《Acta Pharmacologica Sinica》《解剖学报》《潍坊医学院学报》等杂志发表论文5篇,SCI收录2篇。 各阶段实验结果表明：以实验前筛选大鼠结果为第0 d的学习记忆指数,侧脑室定位注射后第7d开始Y-迷宫检测行为学,连续15d。结果显示模型组大鼠的学习能力明显减退。梓醇和多奈哌齐均能改善大鼠的学习能力,第7d各用药组与模型组比较差异无统计学意义,但第14d结果与模型组比较,小剂量梓醇组p＜0.05,多奈哌齐和高剂量梓醇p＜0.01;第21d结果更加显著,这与文献仅观察一个时间段梓醇的作用不同,验证了梓醇作用效果的时间关系。 实验重点观察了梓醇对AD大鼠模型和神经细胞的胆碱能保护作用及机制。结果发现,本次制备的AD大鼠模型大脑皮层和海马形态学呈现典型的衰老性变化,电镜下观察到神经元损伤,细胞器损伤包括核染色质边集,部分线粒体空泡样变等,脂褐素颗粒明显增加。结果梓醇对形态学损伤有改善作用,高剂量作用更显著。对胆碱能标志物胆碱乙酰化酶（ChAT）活性和表达也有改善作用,但是梓醇对M受体的亲和力没有明显影响,说明其作用机制不涉及M受体亲和力方面。 此外,实验过程中我们实验性测定了大鼠部分激素的分泌情况,结果发现梓AD模型大鼠存在激素分泌异常现象,梓醇治疗后激素恢复明显加快,说明梓醇对AD患者紊乱的神经内分泌网络可能有一定的影响,我我们下一步的工作提示了方向。 对比研究目标,本课题的研究预期目标基本完成,课题结果结果为研究开发治疗AD的新型有效药物梓醇研究奠定了良好的基础,也可为中药多靶点治疗慢性神经退变性疾病的研究提供一定的基础。截至目前,仅极少部分实验尚未完成,放射酶分析测定M受体后信号分子PLC的变化,计算M受体生成和降解速率常数。这是因为前期测量方法没有选好,导致PKA和PLC检测数值误差过大,数据不能使用,需再次重新测定,M受体的生成和降解速率常数是由于时间所限,实验没有按预期开展,目前研究生1名正在从事本项研究。