[00111684]Activin A用于人胚胎干细胞无滋养层细胞培养的应用

1.人类胚胎干细胞及诱导多能干细胞定向分化为特定类型的细胞或组织器官有望缓解再生医学面临的日益严峻的供体短缺的困境,是目前解决供体细胞来源严重不足最具潜能的选择方案。 通常人类胚胎干细胞建系不可避免地需要使用多种动物源成分,例如新生牛／胎牛血清、动物源细胞饲养层或其来源的条件培养基等,这些动物源材料可能将动物性病原传给人类,并且造成异种细胞的混杂。由于存在动物源病原、蛋白质等大分子的潜在污染,人类胚胎干细胞的临床应用将有较大风险。 2.ActivinA是一种转化生长因子,具有广泛的生理功能。我们研究发现,Activin A对维持人胚胎干细胞维持自更新能力及多能性是必要且充分的,它能诱导Oct4.Nanog的表达。Oct4（也被称为Pou5F1）和Nanog是维持胚胎干细胞未分化状态的关键转录因子（ Niwa,H.,et al.Nat Genet.2000,24,372-6;Mitsui,K.,et al.Cell.2003,113,6 31-42.）。 3.较低的bFGF含量：目前国外同类培养基主要依靠使用生长因子bFGF维持人胚胎干细胞的全能性,一般浓度高达到100ng/ml。该发明通过添加Activin A（浓度低于10ng/ml）,在不影响培养基各项指标的情况下可使bFGF的用量可以降低到10ng/ml左右。目前bFGF等因子的价格非常昂贵,采用Activin A可以大大降低培养基的生产成本。 该发明转化的培养基产品所有成分都是非常明确的,并将使用血清替代物和各种人源性成分如人bFGF,人ActiVin A,人血清白蛋白等,并且保证所有生长因子在培养基中的较长期稳定性。这将从根本上解决不确定成分及动物源性成分对人类胚胎干细胞／诱导多能干细胞培养的影响及其在临床应用上的障碍。 无需滋养层细胞：目前市售的同类培养基（非条件培养基）大多不支持人类胚胎干细胞的无滋养层培养,而小鼠滋养层细胞不仅会引入动物源成分,而且导致最终培养体系的不确定性。为了不引入动物源成分,部分产品推荐使用人类成纤维细胞作为滋养层,但人类成纤维细胞不易获得,无疑会增加实验的难度。该发明转化的培养基产品可以支持人胚胎干细胞／诱导多能干细胞在无滋养层条件下长期培养150天以上,传代大于20代,仍保持不分化形态及正常核型。 4.该发明面向的目标客户为全国各类从事胚胎干细胞,再生医学等相关研究的各类研究机构、高校及相关医疗应用机构及制药企业等。