[00112098]组织芯片技术在动物疫病诊断中的应用研究

该成果是对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。在动物疫病诊断中，可快速、特异地诊断各种病毒感染，对净化种群具有重要意义。课题在实验的基础上，本着去繁就简、便于操作、适宜推广、突出实效的原则，重点抓了组织芯片的制作方式的改进和临床应用。改进组织芯片的制作方法包括石蜡组织芯片的制作和冰冻组织芯片的制作方法，目前以石蜡切片方法为常用，步骤是：①组织处理；②自制打孔针和取样针；③通量定位模板的制作；④组织切片形态学观察及定位；⑤受体蜡块的制作及打孔；⑥供体蜡块的取样；⑦二次包埋组织芯片石蜡块；⑧切片、裱片。对于冰冻组织芯片的方法， 我们一改所用制作器具价格昂贵，操作过程比较烦琐的瓶颈，改进的制作方法行之有效，操作过程比较简便，价格低廉，技术可靠，可应用于许多普通实验室。步骤是：①自制冰冻组织芯片模具，改装穿刺针一套及相关材料；②OCT阵列模块制作。试验结果：①应用组织芯片免疫组化法诊断疾病：山东某蛋种鸡场送检病料。发病鸡只苍消瘦，羽毛异常，精神状态差，产蛋率低于标准水平，发病死亡率约20%，为了进一步确诊，我们采用了组织芯片免疫组化技术，结果ALV特异性抗原表达阳性见于髓细胞瘤、骨髓、肝脏、脾脏、肾脏、心肌、卵巢、小肠、腺胃。②应用组织芯片快速诊断疾病：2008年12月接诊猪场病例，32头新进育肥猪，自入栏15天后，陆续开始发病，用磺胺药和青、链霉素治疗均不能控制病情。就诊时，已死亡6头。我们采用了包埋法制备冰冻组织芯片，快速诊断疾病。结果显微镜下观察主要病变有：腹股沟淋巴结内出现多灶性凝固性坏死；肺脏呈现多灶性坏死性间质性肺炎；肝脏呈现肝细胞坏死；肾脏有不同程度的多灶性间质性肾炎；心肌呈现不同程度的心肌炎；在小肠的固有层形成合胞体。确诊为圆环病毒与附红细胞体混合感染。③应用组织芯片免疫荧光抗体法净化猪瘟：2008～2009年选择3个规模化猪场进行跟踪监测，及时淘汰阳性猪。2～3次净化，可以稳定地控制猪瘟，使猪瘟的阳性率下降至3%左右，大大降低了各阶段猪群的死亡率，并明显提高了母猪的繁殖性能，取得了良好的经济效益。实验结论：采用组织芯片进行免疫组化方法检测不仅快速，而且可以大大节省试剂用量，避免实验结果的批间和批内差异。所以该方法可以快速、大规模、高通量检测蛋白在组织标本中的原位表达。改进组织芯片的制作方法简单、经济方便，能满足相关科研和临床的需要。对于科研来讲，组织芯片所需要的抗体、试剂量远远少于传统方法对抗体及试剂的需要及使用量，实验过程中可以很好地控制实验条件，实验结果间基本无误差；实验结果可比性好，可提高结果准确性，保证实验质量。对临床应用来讲，组织芯片可以快速的诊断疾病，对规模化养殖场进行跟踪监测，为动物疾病的防治提供有力的技术支持。在改进组织芯片的制作方法试验实践过程中，畜牧工作技术人员一致认为，改进的组织芯片试验，操作性、实用性、准确性、指导性更加突出，在简便易行和实效性上有创新，达到国内同类研究先进水平，非常适合我市作为养殖业大市经济发展的需要，适宜大规模推广。