[00112148]胶束毛细管电动色谱在线推扫富集技术检测动物食品中残留的喹诺酮类兽药

一、课题来源、背景、技术原理：　　本课题为河北大学人才引进项目（Y2004039），河北大学自然科学研究计划项目（2005408）。　　在过去几十年中，随着畜牧业机械化的养殖，为了防治畜禽疾病以及促进畜禽生长等，广泛使用药物或饲料添加剂，导致兽药残留蓄积在动物性食品中，构成对人体的毒性。兽药特别是亚治疗量的各类抗生素在畜牧生产中的应用显著增加，其对人体的危害日益显著，如引起耐药性，中毒反应，二重感染和变态反应等，由此导致的动物性食品中兽药残留问题越发突出。发展可靠、灵敏和实用的残留分析技术无疑是检测和控制兽药残留、保证食用者安全和避免国际间有关贸易争端的重要前提。　　喹诺酮类药物是一种广谱抗菌药，在动物的养殖和饲料中得到广泛应用，目前对于动物食品中喹诺酮类药物的检测，多采用紫外分光光度法（UV），高效液相色谱法（HPLC）和区带毛细管电泳法（CZE）等，前二种方法样品预处理需经过提取、纯化、浓缩等过程，操作繁琐，测定成本高，CZE的检测灵敏度低，在应用于痕量分析时受到一定的限制。　　胶束毛细管电泳（MEKC）在分离科学中的应用已有广泛的报道，它的出现扩展了毛细管电泳的应用范围，但其和所有的毛细管电泳方法一样，由于毛细管内径小，受检测器、检测光程和进样量的限制，检测灵敏度不是很高，使毛细管电泳技术在应用于痕量分析时受到一定限制。如何提高其检测灵敏度成为一项具有挑战性的工作。　　近几年发展起来的方法主要有：发展高灵敏度的检测器、设计特殊类型的检测池增加检测光程、引入离线预富集技术和在线富集技术。其中胶束毛细管电动色谱在线推扫富集技术（MEKC On-line Sweeping）因具有较高的检测灵敏度，样品预处理简单，分辨率高，分析速度快，恰好解决了这个问题。胶束毛细管电动色谱在线推扫富集中，样品带不含胶束相，而背景带含有胶束相。当施加电压后，胶束定向移动通过样品带时，胶束与样品相互作用带动样品一起运动使样品带压缩从而实现富集，对标准品的富集倍数可达100至5000倍，满足痕量分析要求，不需要预浓缩，大大简化了预处理过程，缩短了分析周期，经济实用而有广泛的应用前景。利用此项技术进行动物性食品中痕量喹诺酮类兽药残留量的检测尚未见国内外报道。可见，MEKC On-line Sweeping在这些方面的研究有待进行。　　二、性能指标：　　本实验室近年来一直致力于MEKC On-line Sweeping技术检测动物性食品中喹诺酮类兽药残留的研究，主要完成的成果有以下方面：　　1.以环丙沙星、氧氟沙星和恩诺沙星为代表，考察了影响富集的各种因素，使其检测限有效降低，分别达到了0.007，0.016和0.020mg/L，可满足国际上制定的“动物性食品中喹诺酮类兽药残留最高限量标准”。　　2.该方法可使环丙沙星、氧氟沙星和恩诺沙星达到有效分离，同时进行检测。　　3.在样品预处理过程中，以三氯乙酸为沉淀剂，能有效除去生物样品中的干扰杂质，直接上机分析，方法简便易行，实用性强，能够满足各兽药监察所以及进出口检验等单位对动物性食品的日常抽查检测。　　4.将建立的方法应用于市售动物性食品（主要包括猪肉组织、猪肾脏和肝脏、动物血液等）中环丙沙星，氧氟沙星和恩诺沙星痕量残留量的测定。　　三、创造性、先进性：　　建立了一种检测动物性食品中残留痕量喹诺酮类兽药的MEKC On-line Sweeping检测新方法、新标准，能够满足各兽药监察所以及进出口检验等单位对动物性食品的日常抽查检测。　　1.检测灵敏度高，可满足国际“动物性食品中喹诺酮类兽药残留最高限量标准”。　　2.样品预处理方法简单。　　四、技术成熟程度、适用范围、安全性、应用情况及存在问题：　　本课题建立的MEKC On-line Sweeping富集技术测定动物性食品中痕量喹诺酮类兽药残留的新方法，使环丙沙星，氧氟沙星和恩诺沙星达到了基线分离，提高了检测灵敏度，与已建立的其它毛细管电泳技术测定喹诺酮类兽药残留方法相比检测限值低；与高效液相色谱法测定喹诺酮类兽药残留标准相比检测限值低或相当，但样品前处理方法简单，有机溶剂用量少，测定成本低；满足了体内残留的痕量和超痕量喹诺酮类兽药分离检测的分析要求，使检测限能够满足国际“动物性食品中喹诺酮类兽药残留最高限量标准”。　　将该方法成功地用于了市售动物性食品中三种兽药残留检测，为动物性食品中痕量喹诺酮类兽药残留的检测提供了一种新方法，填补了该技术用于动物性食品中痕量喹诺酮类兽药残留量测定研究的国内外空白，各兽药监察所以及进出口检验等单位能采用此方法跟踪检测各种动物性食品中喹诺酮类兽药残留情况。　　该方法的建立可为其它类兽药建立简单、灵敏的检测方法提供更加广泛的思路。另外，MEKC On-line Sweeping富集技术是一种新的色谱方法，尚有许多工作有待完善，需要不断深入研究。今后会继续进行动物性食品中兽药残留量的MEKC On-line Sweeping检测方法研究，将该技术与选择性耗尽进样（SEI）相结合，从而使兽药残留的检测更加灵敏，能够满足更高的检测要求；进一步建立其它经常使用和残留严重的兽药的MEKC On-line Sweeping检测法，并使该方法简便的应用于动物性食品中各种兽药残留量的检测；将MEKC On-line Sweeping技术用于兽药药物代谢动力学的研究，研究兽药在体内的代谢过程和分布情况，为兽药残留的检测提供更广泛的思路。