[00114333]一种靖西细筒苣苔组培叶片两步成苗方法

本专利研究是由广西卫生厅课题“广西2种特有苦苣苔科植物种质资源保存及繁育技术研究”资助完成。由广西壮族自治区药用植物园独立承担。本发明属于组织培养技术领域,具体地,涉及靖西细筒苣苔叶片组培两步成苗法。背景技术：靖西细筒苣苔为苦苣苔科细筒苣苔属植物,是2011年发现的新种,靖西细筒苣苔为多年生草本,根状茎圆柱形,叶片肾形或圆形,花序梗、花序和花期外被线状短柔毛和紫色腺体,花期5-6月,果期6月。中国特有珍稀植物,特产广西靖西,生于石灰岩山地岩石上,海拔约为200-250m。靖西细筒苣苔分布区域极其狭窄,目前仅在广西靖西地区石灰岩山陡崖上发现少量植株,由于生长环境恶劣缺少水肥,加之其种子细小,萌发需要的温度范围、湿度范围和土壤酸碱度范围比较小,自然界难以进行有性繁殖,急需建立有效的繁育和保护体系,本发明旨在通过组织培养技术叶片两步成苗法对靖西细筒苣苔种质资源进行有效的繁育和保护,是目前对靖西细筒苣苔育苗最便捷、稳定的手段,可以节约大量的人力、物力和场地,便于种质交换和转移,避免有害病虫的人为传播。为了实现上述目的,本发明提供了如下技术方案：一种靖西细筒苣苔叶片组培两步成苗法：取靖西细筒苣苔幼嫩叶片作为外植体进行灭菌处理,然后将其切分成含主脉0.5 cm×1 cm大小后接种到诱导及分化培养基上,1 ~1.5个月后选择幼嫩叶片上分化出的具有2片以上叶子、高1~2.5cm的无菌芽苗转接到壮苗生根培养基上;当无菌苗每株生根4条以上、根长达2.5~4cm时,打开瓶盖,在室内炼苗3~4天后,将组培苗从培养瓶中取出,洗去培养基,将其移栽至灭菌的栽培基质中;上述诱导及分化培养基为：以MS为基本培养基,每升添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）1~2.0mg、α-萘乙酸（NAA）0.3~1mg、激动素（KT） 0.2~0.5 mg、琼脂3.8~4.5g和蔗糖20~25g,pH值5.8~6.0,培养温度为24±2°C,光照强度1800~2600lux,光照时间为8~10小时/天;上述壮苗生根培养基为：以1／2MS为基本培养基,每升添加NAA0．5~1．5mg、6-BA 0.2~0.5、 吲哚丁酸（IBA）0.5~1.0, 琼脂3.8~4.5g和蔗糖25~30g,pH值调节至5．8~6.0。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高,可在短期内提供大量靖西细筒苣苔的优质种苗,并减少了配制培养基和转瓶的步骤,节约了大量人力物力,因此简单易行、生产成本降低,有效解决了靖西细筒苣苔规模化育苗及种质资源保存问题。