[00114820]卫视并殖吸虫二、三倍体的定种研究

1.建立了螺蛳和溪蟹饲养池：2011年实验动物感染的同时,就要着手建立两个以上的人工饲养池,为保证成活率要寻找野外适宜的自然山坑环境或引来井水,避免含率水;放养邻近非疫区捕捉来的细小放逸短沟蜷和溪蟹以备用。 2.猫或狗感染成功后,不断收集含有两型虫卵的猫、狗粪便分别经常投入饲养池中,让虫卵孵出毛蚴,以感染池内的螺蛳。 3.经3-5个月感染,螺体内逸出尾蚴,自然侵入感染同一环境中的溪蟹。 4.经1-3个月,检查溪蟹内的成熟囊蚴,检测其大小、形态。作前后比较。或再作第二代生活史循环感染实验动物之用。 5.根据记录和摄影材料观察比较前后检测结果的异同或变化及其程度,最终判定两者是仅仅发生微小的改变或是发生明显的改变,即两者是保持不变的特点还是可发生互为转化的改变,并分析影响其变化的相关因素和条件,综合作出卫氏并殖吸虫二、三倍体型是各自独立的虫种或是同物异名的判定。本课题结束,完成合同规定的目标： 1.解决了百年争鸣 迄今未决的问题,即卫氏并殖吸虫二、三倍体型独立性的研究; 2.进一步评价了染色体技术在并殖吸虫虫种上的应用与价值; 3.从成、幼虫形态、染色体与DNA（COI和ITS2）检测和生活史循环,综合判定卫氏并殖吸虫二、三倍体型的独立性或同物异名。 4.培训了一批从事并殖吸虫研究的熟练团队,培养硕士研究生2名;发表论文5篇。 5.为促进已有联系的韩、日学者之间的国际合作打下基础; 6.对中国并殖吸虫,如陈心陶的斯氏并殖吸虫和钟惠澜等四川并殖吸虫,参照 本课题研究结果进行全面清理,写成多篇文章,既可作为单篇发表,也可结集出版专著。此外,我们也进行了卫氏并殖吸虫的染色体研究： 1)在浙江省宁波市疫区和福建省各疫区捕捉溪蟹,从中分离卫氏并殖吸虫二、三倍体型囊蚴,分别感染猫或狗等动物,3个月后获取成虫和虫卵,检测并比较两者的形态、结构的差异。 （2）取囊蚴、成虫作卫氏并殖吸虫染色体和DNA（COI和ITS2）的检测,PCR扩增ITS2和部分COI基因的目的基因,产物纯化后直接测序分析其同源性,构建种系发生树,并比较其间的异同。 （3）综合研究结果,初步解决卫氏并殖吸虫的定种问题。 现有的国内外研究结果表明,卫氏并殖吸虫二倍体型和三倍体型对人体致病性存在明显的差异,导致的临床症状各有不同。本研究综合应用形态、分子生物学和分子遗传学技术进一步对卫氏并殖吸虫的遗传型和致病性进行探索和验证,解决定种问题。目前,在浙江省宁波市等疫区环存在感染了卫氏并殖吸虫二、三倍体型的中间宿主,每年还有较多的卫氏并殖吸虫病患者,。所以本课题按照合同规定,进行了宁波地区卫氏并殖吸虫二、三倍体型的定种研究,初步确定卫氏并殖吸虫存在两个种型,二倍体占优势种,而三倍体可能是一新种。本课题结束,整理并发表文章5篇,培养硕士生2名。迄今,本课题大致结束,已在国内外杂志发表论文5篇。