[00115700]蒙古黄芪内生菌分离及其活性代谢产物的研究

内生菌与药用植物存在共生关系,内生菌能够影响药用植物活性成分的产生和积累,但关于黄芪属药用植物根块内生菌方面的研究未见报道。本文对黄芪属植物蒙古黄芪的内生真菌进行了分离和鉴定,利用得到的内生真菌进行了内生真菌发酵条件的初步优化和黄芪有效成分的初步研究。 首先,选用四种成分不同的培养基,以蒙古黄芪健康植株的块根为材料,在多种表面消毒方法的基础上进行内生真菌的分离,共分离出内生真菌28株。参照《真菌鉴定手册》和《真菌分类学》,通过形态培养,显微观察和18S rDNA序列测定,结果表明,这些菌株可归为7个属：镰孢菌属（19株）,生赤壳属（3株）,裸胞壳属（2株）,枝穂霉属、枝顶孢属、青霉属及曲霉属各（1株）。 同时利用其中分离出的5株内生真菌进行了液体发酵培养,在发酵液配方组成不变的情况下,全面分析了发酵温度、发酵时间、装液量、接菌量、摇床转速五因素对发酵所得菌体干重的影响,并探讨了各因素间存在的交互作用情况。结果表明：不同的内生真菌对不同的液体发酵影响因素的敏感程度略有不同,但装液量、摇床转速、发酵时间及发酵温度成为影响蒙古黄芪内生真菌液体发酵的主要因素,接菌量在本实验中没有集中的最优水平。经DPS软件综合分析发现同时满足装液量100ml,摇床转速150r/min,温度31℃,发酵时间8天的发酵条件,菌体干重达到最大的菌株数最多。 此外,对28株内生真菌中进行了液体发酵培养,经颜色反应、TLC检测、HPLC检测对发酵液中的黄芪皂苷、黄芪黄酮、黄芪多糖三大类有效成分进行了初步检识。