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本发明公开了一种制备神经干细胞的方法,包括用N2B27培养基诱导培养P19细胞,获得的细胞群中神经干细胞可占94%以上。本发明的方法在无血清环境中培养P19细胞且无需视黄酸的参与,既可排除成分复杂的血清的干扰,又可避免获得的神经干细胞被视黄酸后方化,并且,所述方法不导致选择性细胞凋亡,是一个直接从多潜能干细胞到神经干细胞的命运转变过程。本发明获得的神经干细胞具有前端神经板特性以及分化全能性,可很好地模拟体内的神经发生过程,因此可以作为研究模型,用于分析从上胚层细胞到神经外胚层的神经诱导和神经分化过程,为研究胚胎着床后的发育事件提供了理想途径。