[00116782]长链非编码RNA HIF1A-AS1 促进肝癌细胞自噬参与肿瘤生长转移的作用机制

目的 由于原发性肝癌的高发病率和高死亡率,目前它仍然是中国社会的主要健康负担之一。许多研究表明长链非编码RNA在肿瘤的发生发展中起着至关重要的作用,这向我们提示了一种新的诊断和预后预测或者肝癌治疗的方法。本研究旨在研究长链非编码RNA HIF1A-AS1在肝癌的发生发展过程中的作用,并探讨其相关机制。 方法 1.利用荧光定量逆转录-聚合酶链式反应技术检测50对肝癌组织及其对应的癌旁组织中HIF1A-AS1的表达。收集这50对肝癌组织对应的肝癌病人的信息,包括年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、是否有淋巴结转移、复发率、生存时间等,以HIF1A-AS1的表达的中位数作为中点,分为高表达组和低表达组分别25人,探究HIF1A-AS1表达与临床病理特征及预后的关系。 2.利用qrt-PCR技术检测在肝癌细胞系及正常肝上皮细胞中HIF1A-AS1的表达水平在不同培养条件下。对肝癌细胞系进行饥饿培养,用EBSS培养基培养0h、12h、24h、48h、72h,利用qRT-PCR技术检测不同饥饿培养时长下HIF1A-AS1的表达变化。 3.将靶向HIF1A-AS1（si-HIF1A-AS1）和阴性对照（si-NC）的SiRNA分别转染到HCC细胞中。si-HIF1A-AS1的抑制作用通过qRT-PCR分析证实。利用CCK8法、流式细胞术检测在饥饿培养状态下抑制HIF1A-AS1的表达对肝癌细胞活力、凋亡的影响。 4.利用蛋白印迹法探究饥饿培养状态下自噬相关分子的表达变化,及HIF1A-AS1的表达与细胞自噬之间的关系及可能的下游机制。 结果 1.与对应的癌旁组织相比,肝癌组织样本中的HIF1A-AS1表达明显上调。统计分析表明,高水平的HIF1A-AS1与肿瘤大小,TNM分期和淋巴结转移显著相关。HIF1A-AS1表达与其他临床病理特征（包括年龄,性别）之间无显着相关性。此外,与HIF1A-AS1低表达组相比,HIF1A-AS1高表达组的患者总生存期较短,无病生存期较短。 2.在正常培养条件下,HIF1A-AS1在肝癌细胞系中的表达水平明显高于正常肝细胞L02中的表达水平。在缺营养培养条件下,HIF1A-AS1在肝癌细胞系和正常肝细胞系中的表达均显著增加。此外,在7721和Huh7细胞系中,随着饥饿培养时间的延长,HIF1A-AS1的表达增加。 3.CCK-8分析的结果表明,在饥饿培养的情况下,用si-HIF1A-AS1转染的肝癌细胞系的增殖显著低于si-NC组。流式细胞术测定证实,抑制HIF1A-AS1的表达可以增强饥饿诱导的肝癌细胞的凋亡。 4.在饥饿培养12h后,肝癌细胞系中自噬标志物的表达显著增加。在同样饥饿培养12h后,2种肝癌细胞系中的HIF1A-AS1抑制组中BECN1的表达增加和LC3I至LC3II的转化均被逆转。此外,在肝癌细胞系中,HIF1A-AS1抑制组的HIF-1α和磷酸化的mTOR的表达均显著降低。 实验结果,明确了肝癌组织中 HIF1A-AS1 表达水平与肿瘤生长相关性;阐明 HIF1A-AS1 调控肝癌细胞自噬参与肝癌生长作用及其相关机制。长链非编码 RNA HIF1A-AS1 在肝癌组织及肝癌细胞系中均呈现高表达的状态,并且肝癌组织中 HIF1A-AS1 的表达越高,肝癌患者的预后越差。另外,抑制 HIF1A-AS1 的表达可以促进饥饿诱导的肝癌细胞的凋亡,并且这可能是由 HIF-1α/mTOR 途径相关的细胞自噬介导的。