[00116813]同步去除腐植酸和菌体蛋白的总DNA提取方法及试剂盒

在执行江西省科技厅的项目“鄱阳湖（湖体核心区）微生物资源考察及多样性研究”中,为了揭示鄱阳湖不同生态系统中的微生物菌群结构、种类和分布的差异及特点,以及这些微生物菌群结构的多样性与湖区环境因素之间的相关性,环境样品总DNA的18SrDNA和16SrDNA基因序列分析手段已被广泛采用。这就要求首先能获得合格的样品微生物总DNA。鄱阳湖水体底泥和湖滩土壤作为生态系统的主要组成部分,其微生物菌群多样性分析显得尤为重要。虽然一般环境中的微生物总DNA 还比较容易提取且方法成熟,但是土壤微生物总DNA 的提取产物却受到各种土壤成份残留的影响,特别是其中腐植酸残留会抑制PCR的进行,使后续研究难以进行。 本发明是一种土壤（包括底泥）样品微生物总DNA的提取方法及提取试剂盒,即用腐植酸复溶液和PBS缓冲液分步洗涤样品以溶解去除腐植酸,离心得到样品沉淀;沉淀细胞经3步裂解法裂解,然后通过离心得到含有DNA的上清液,在上清液中加入聚氯化铝混凝剂混凝沉淀残存的腐植酸和菌体蛋白,离心后的上清液可直接沉淀而获得高质量的总DNA。本发明两次脱腐效果更佳,不用苯酚氯仿试剂,也不用吸附与解吸附过程,整个提取过程一个样品只用三个离心管,简单、快速和经济。一次提取的量足以进行几十次的PCR分析实验,当然本发明也可用于普通样品微生物总DNA的提取,只是无需复溶和洗涤样品,此时使用的混凝剂只是用于去除菌体蛋白。具体来说就是一种简单快速提取土壤微生物（也包括普通微生物）总DNA 的方法。