[00116983]海水鱼类神经坏死病毒综合防控疫苗研制

课题任务来源于广东省科学技术厅的科技计划项目：2015年度省公益研究与能力建设专项。项目名称: 海水鱼类神经坏死病毒综合防控疫苗研制,项目编号：2015B020203001。 海水鱼类神经坏死病毒（nervous necrosis virus,NNV）可感染众多野生和养殖海水鱼类,尤其苗期爆发能引起极高的死亡率,对某些品种致死率达100%,已成为我国海水养殖主要病原之一。NNV传染方式有三方面,即亲鱼带毒造成垂直传播,鱼卵表面病毒在受精时被带入,仔稚鱼敏感期受病毒直接侵染。为防控NNV,本项目研制了三种免疫制剂直接针对NNV侵染的三个方面进行全方位的预防及阻断,这些免疫制剂能根据养殖条件灵活组合运用,形成针对NNV的综合防控疫苗,达到全面而有效地防控神经坏死病。 制剂一：亲鱼用类病毒颗粒（VLP）注射疫苗;效果：清除体内病毒阻止垂直传播。针对亲鱼携带NNV的情况,本成果以VLP疫苗进行注射免疫,实现清除体内NNV的效果,更发现母源抗体能传递至受精卵及仔鱼中,起到一定的抗NNV作用。对VLP氨基酸的改造获得既保留原有免疫原性又增加了可以亲和层析的标签氨基酸,使VLP疫苗的纯化步骤能对接大规模生产,更有利于VLP疫苗的商业化,属于技术创新。该疫苗安全高效,生产制备成熟,其中利用高压均质机破碎细菌不但短时高效还能保持完好VLP立体结构,是工艺创新。 制剂二：鱼卵用的中和病毒的清洗液;效果：全面高效地中和所有血清型NNV,降低受精时带入NNV的风险。针对鱼卵表面病毒在受精时被带入的情况,本成果以鱼卵清洗液中和及去除所有血清型NNV,为人工干法授精提供SPF级别的鱼卵。清洗液主要成分是一定比例的核酸适配体和融合蛋白复合物,能保持高度特异性的条件下,对β野田村病毒属中的全部病毒做到广谱中和。清洗液进一步配合鱼卵清洗器,可在短时间内有效去除鱼卵表面病毒,基本不影响鱼卵受精率和孵化率,其生产制备已成熟。鱼卵受精前清洗是防范NNV的创新操作方法,清洗液能全面清楚所有血清型NNV且不影响受精卵及孵化率是技术创新。 制剂三：仔稚鱼用的浸泡疫苗;效果：刺激先天性免疫及细胞免疫系统,为仔稚鱼提供20天左右的保护作用。针对仔稚鱼易感阶段,研制了以杆状病毒为载体的表面展示浸泡疫苗 Bac-Noda,通过短时间多次浸泡能以杆状病毒丰富的外膜蛋白及NNV衣壳蛋白的外凸结构域刺激免疫系统以提升免疫系统活跃度,达到抵抗 NNV 侵染的目的。仔稚鱼因其体型小不可能通过注射免疫,且获得性免疫系统发育不完善,NNV灭活疫苗及VLP疫苗通过浸泡免疫方式并不能获得理想保护效果,因此Bac-Noda能有效解决这些难题,是具有实用价值的供仔稚鱼用的浸泡疫苗。该疫苗利用整个杆状病毒作为载体,安全性好,生产制备成熟;利用流感病毒神经氨酸酶部分序列作为信号肽及锚定蛋白高效稳定地将NNV衣壳蛋白的部分序列展示在杆状病毒外膜外表面,是技术创新。目前对该浸泡疫苗在水体的半衰期和长期安全性正进行测试。 以上三种免疫制剂已经根据养殖环境和养殖条件的实际情况进行灵活调整,在工厂化养殖场地、近岸网箱及深水网箱等养殖条件下开展了小规模应用,可有效降低被 NNV 侵染的几率。三种免疫制剂的研发、生产及因地制宜使用的防治方法即为神经坏死病毒综合防治技术。