[00117050]家畜戊型肝炎病毒检测巢式反转录聚合酶链反应法

1.课题来源：本标准为自治区质量技术监督局下达广西兽医研究所承担的2012年第十一批广西地方标准制定（修订）项目计划（桂质监函[2012]836号）,编号为2012-1106（属自筹项目）,项目定名为《家畜戊型肝炎病毒检测 巢式反转录聚合酶链反应法》。 2.技术原理及性能指标：本标准主要依据是参考有关文献资料,结合我国国情以及广西实际,通过实验室研究试验及临床验证后,并参考其他资料经室内、室间验证提出。本标准的主要内容是通过巢式RT-PCR对临床病料样品或者细胞培养物中HEV进行快速检测与诊断。 以HEV参考株为模板,建立了检测家畜HEV的巢式RT-PCR 方法。应用该方法对HEV参考株RNA 进行扩增,获得与预期大小相符,长度为328bp的目的片段。而阴性对照、空白对照、PRRSV、CSFV以及PPV、PRV、JEV扩增产物均无328bp特异性条带出现。检出HEV-RNA 的灵敏度约为9pg 。表明该方法对HEV 的检测特异性强、敏感性高。在采集的1177份HE疑似病料样品中,采用该方法检测有334份为HEV阳性。该方法可满足对猪、牛、羊的粪便、肝脏样品中HEV 检测的需要。 3.应用情况及存在的问题：由于受到时间紧、资金有限以及疫病综合防控监测与效果评估所需要求条件所限,在大范围内尤其在中小型猪场及散养户推广应用本课题成果,还需在时间、资金、沟通协调及技术方面加强支持力度。