[00117256]一个新天然产物铁杆蒿呋喃酮苷的抗肿瘤作用及其机制研究

本课题是国家自然科学基金项目,起止时间为2017年01月至2020年12月。铁杆蒿呋喃酮苷是蒙药铁杆蒿中分离得到的一个新母核二苯乙烯类化合物。铁杆蒿呋喃酮苷结构可视为二苯乙烯基本母核的二碳链（C2）被氧化并环合而成,是白藜芦醇的结构类似物,具有潜在抗肿瘤、抗炎、抗氧化等活性。为了明确其在该植物中相对含量,采用高效液相色谱法对不同来源铁杆蒿供试液中铁杆蒿呋喃酮苷的含量进行分析。为了后续实验的顺利进行,课题组采用化学法合成大量的铁杆蒿呋喃酮苷。同时,研究铁杆蒿呋喃酮苷诱导人胃癌细胞（MKN-45）发生凋亡和自噬的分子机制,探讨铁杆蒿呋喃酮苷诱导条件下凋亡和自噬相互关系的分子基础。铁杆蒿经石油醚-三氯甲烷（6:1）混合溶液脱脂后,药渣用乙醇提取制备供试液。采用高效液相色谱法建立不同来源铁杆蒿供试液中铁杆蒿呋喃酮苷的含量测定方法。以茴香醛为原料,通过亲核加成、亲电取代及脱水成环反应合成铁杆蒿呋喃酮苷,并运用NMR法鉴定其结构式。利用MTT法观察铁杆蒿呋喃酮苷对MKN-45增殖的影响;通过分组处理后,在给药24h后提取细胞总蛋白,应用Western Blot免疫印迹法检测细胞中自噬相关蛋白（LC3B、Beclin1）和凋亡相关蛋白（BAX、BCL-2、Caspase-3）的表达水平。不同来源铁杆蒿中铁杆蒿呋喃酮苷含量变化范围在0.342~0.614mg.g-1。这一结果说明铁杆蒿呋喃酮苷在铁杆蒿中相对含量较低,从该植物中制备铁杆蒿呋喃酮苷是很难的问题。通过化学合成得到了大量铁杆蒿呋喃酮苷,产率为53%。经1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HSQC、和HMBC图谱分析,确定其结构为6-羟基-4-甲氧基铁杆蒿呋喃酮-4-O-β-D-葡萄糖苷。铁杆蒿呋喃酮苷浓度在400-1000μmol/L范围内作用在24-36h,对MKN-45细胞的增殖均有明显抑制作用（P＜0.01）;WesternBlot结果显示铁杆蒿呋喃酮苷可诱导MKN-45细胞发生凋亡和自噬,即抗凋亡蛋白BCL-2的表达量明显降低（P＜0.01）,而促凋亡蛋白BAX表达量则明显增加（P＜0.01）,蛋白Caspase-3的表达量明显增加（P＜0.01）;自噬蛋白Beclin1的表达量增加（P＜0.01）,蛋白LC3II/I的比值明显增加（P＜0.01）。 本课题研究过程中,发表了2篇SCI收录论文、2篇国家级核心期刊论文。获得国家知识产权局发明专利1项（ZL.201510159360.0）。