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本发明公开了一种环境水体中肠道病毒的定量检测方法,该方法根据肠道病毒RNA5’非编码区保守序列的同源性,在已有的引物EV1和EV2的基础上,再设计一对肠道病毒通用引物EVN,制备了一系列梯度稀释的重组质粒作为标准品,建立了运用肠道病毒通用引物EVN的实时荧光定量PCR反应体系,定量检测环境水体中的肠道病毒含量。该方法定量准确、大幅度提高了现有的环境水体中肠道病毒定性RT-PCR检测技术的灵敏度,线性范围宽广,精密度高,具有良好的特异性,与环境中常见的其他病原微生物没有交叉反应.