[00118368]高血脂对胰岛beta细胞肠促胰岛素反应的影响及机制探讨

为了明确高血脂与肠促胰岛素反应紊乱的关系,我们首先体外培养大鼠胰岛beta细胞系INS-1E,予高脂干预后,GLP-1刺激INS-1E细胞产生的胰岛素明显下降,提示高脂条件下胰岛beta细胞对GLP-1反应性下降,而GLP-1受体均为G蛋白偶联受体,在受到配体刺激后能够刺激细胞内产生cAMP,激活下游信号转导通路,因此本课题通过检测GLP-1刺激细胞内cAMP量以及cAMP下游信号通路的强度来反应GLP-1受体功能的变化,结果显示随着棕榈酸浓度的增加,细胞内cAMP含量及p-CREB的表达亦明显下降,GLP-1受体的mRNA表达也明显下降。进一步证实高脂可引起胰岛beta细胞GLP-1受体及受体后通路受损,可以部分解释临床上2型糖尿病患者肠促胰岛素治疗疗效不同的原因。在探讨高脂引起胰岛细胞肠促胰岛素紊乱机理方面,本课题首先发现PKC升高可能与受体表达下降有关,有研究显示PKC亚型PKCa直接参与了高血糖调节肠促胰岛素受体表达的过程。 本课题使用基因过表达的方式,通过腺病毒感染使得胰岛细胞PKCa过表达,引起GLP-1受体的明显下降,证明高脂引起肠促胰岛素紊乱与PKC有一定的相关性,提示PKCa参与了棕榈酸引起的GLP-1受体的下调。我们进一步构建高脂动物模型来验证体外实验结果,高脂饮食组的血脂明显高于普食组,说明高脂模型造模成功,RT-PCR法检测大鼠胰腺的GLP-1受体表达明显低于正常大鼠,体内证实高脂可以下调GLP-1受体的表达引起肠促胰岛素功能紊乱,而调脂药物的使用后胰腺GLP-1受体表达量能够上调接近正常水平。高脂动物模型中PKC而不是TCF7L2的表达明显升高,结合体外实验推测PKC可能是高脂引起肠促胰岛素紊乱的一个重要信号蛋白。 本研究结果证实,高脂可以通过下调GLP-1受体的表达引起胰岛beta细胞对肠促胰岛素的反应受损,通过过表达研究证实PKC而不是TCF7L2参与了GLP-1受体的下调,调脂药物的使用可以部分恢复GLP-1受体的表达,基于这些基本实验结果,我们将试图为临床基于肠促胰岛素的治疗方法提供有意义的指导意见。