[00118399]大肠癌中Cyclin E、p27kipl和Ki67的表达及临床病理意义

任务来源：“大肠癌中Cyclin E、p27kipl和Ki67的表达及临床病理意义”是唐山市工人医院承担的2007年度唐山市科学技术研究指令计划项目，课题编号为07134643b。属于基础研究项目。　　主要研究内容：大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，而细胞周期调节机制紊乱在大肠癌的发生发展中具有重要的作用。Cyclin E和p27kipl是大肠癌的发生及侵袭转移的正性因子和负性因子，Ki67抗原是核基质的一部分，是应用最广泛的增殖细胞标记之一。而大肠癌中Cyclin E和p27kipl和 Ki67联合检测的研究未见报道，因此本实验应用免疫组化检测大肠癌及其邻近正常粘膜组织中Cyclin E、p27kipl和Ki67的表达，并分析它们与大肠癌临床病理特征的关系，有助于判断大肠癌的恶性趋势及生物学行为，并判断预后，为大肠癌的个体化治疗提供依据。　　主要技术性能指标：本实验共收集河北医科大学附属唐山工人医院自2004年10月～2005年12月期间大肠癌手术切除标本137例，每例标本均采集大肠癌组织（避免取在肿瘤中心坏死区）、邻近正常粘膜组织（均取在标本近端切缘处）。所有标本均经10%中性缓冲福尔马林固定，常规石蜡包埋。组织蜡块连续切片，每例5张，片厚4μm，一张行HE染色，1张以PBS溶液替代一抗行阴性对照，另3张分别行p27kipl蛋白、细胞周期蛋白E（Cyclin E）和Ki67免疫组织化学染色。通过应用免疫组化PowerVision两步法检测大肠癌及其邻近正常粘膜组织中Cyclin E、p27kipl和Ki67的表达，并分析它们与大肠癌临床病理特征的关系。与国内外同类技术比较：大肠癌是人类主要的恶性肿瘤之一，常见的消化道恶性肿瘤。大肠肿瘤的发生发展是多基因参与、多步骤、多阶段的复杂过程[3]，在这个过程中，细胞周期调节机制的紊乱具有重要的作用，近年来细胞周期与肿瘤发生的关系愈来愈受到人们的重视。目前细胞周期已成为全世界研究的热点，Cyclin E、p27kip1和增殖核抗原Ki67在大肠癌的发生、发展中均起重要作用。为了进一步明确Cyclin E、p27kip1和Ki67抗原在大肠癌中的作用，该课题采用免疫组化技术检测Cyclin E、p27kip1和Ki67在大肠癌组织和邻近正常粘膜中的表达，并分析各检测结果与临床指标的关系，进一步明确Cyclin E、p27kip1和Ki67抗原在大肠癌中的作用，提示联合检测Cyclin E、p27kip1和Ki67有助于判断大肠癌的恶性程度及生物学行为，并判断预后，为大肠癌合理的临床诊治及准确的预后评估提供理论依据。　　该课题经《河北省科学技术信息研究所》从1998～2007年的《中国专利文献数据库》、1988～2007年的《中国科技成果数据库》、1989～2007年的《中文科技期刊篇名数据库》、《中国学术会议论文数据库》（2007年版）、《中国学位论文数据库》（2007年版）、1992～2007年的《中国报刊科技新闻数据库》、1994～2007年的《中国企业、公司及产品数据库》、近半年的有关专业现刊、1990～2007年的《河北省科技成果数据库》、http//www.nast.org.cn国家科技成果网、http：//www.wanfangdata.com.cn万方数据库、1985～2007年的《中国药学文摘》、1985～2006年的《中国医学文摘》、1985～2007年的《中文资料目录》（医药）等收录的文献中以手工检索。光盘检索和联机检索后得出的结论是：除该课题委托人“吴志宇大肠癌中Cyclin E、p27kipl和Ki67的表达及临床病理意义”的研究外，国内未见完全的文献报道。综合本研究的技术水平和临床应用价值，与国内外同类研究与技术相比，具有系统性、创新性、科学性和可行性，达到国内领先水平。　　创新点与技术关键：　　（一）关键技术　　PowerVision二步法免疫组化检测大肠癌中Cyclin E、p27kipl和Ki67蛋白的表达量。　　（二）创新点　　1、联合检测Cyclin E、p27kip1和Ki67在大肠癌中的表达Cyclin E、p27kip1和Ki67的相关性在各种肿瘤中，均研究较少。该课题得出以下结论：Cyclin E和p27kip1作为大肠癌的正性和负性调控因子，二者共同作用，促进肿瘤进一步发展、转移，联合检测Cyclin E、p27kip1和Ki67有助于判断大肠癌的恶性趋势及生物学行为，并判断预后，为大肠癌的个体化治疗提供依据。　　2、采用PowerVision二步法免疫组化检测技术进行Cyclin E、p27kip1和Ki67蛋白表达水平的研究PowerVision二步法是将二抗抗体分子的单价Fab片段和酶通过高分子葡聚糖聚合在氨基酸骨架上形成多聚体，既保留了抗体特异性结合抗原能力，又可有效地避免聚合分子过大而造成的空间位阻，使每一个抗体分子与多个酶分子相连，替代传统的二抗和三抗，直接放大抗原抗体结合的信号，可以将位于人和动物的组织切片和细胞涂片的抗原定位。与传统的SP、ABC法相比，此法具有简单、快速、敏感等特点，是目前已知的灵敏度最高的检测系统。　　推广应用前景与措施　　大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，而细胞周期调节机制紊乱在大肠癌的发生发展中具有重要的作用。Cyclin E和p27kipl是大肠癌的发生及侵袭转移的正性因子和负性因子，Ki67抗原是核基质的一部分，是应用最广泛的增殖细胞标记之一。而大肠癌中Cyclin E和p27kipl和Ki67联合检测的研究未见报道，因此本实验应用免疫组化检测大肠癌及其邻近正常粘膜组织中Cyclin E、p27kipl和Ki67的表达，并分析它们与大肠癌临床病理特征的关系。　　本研究的圆满完成，进一步明确了Cyclin E、p27kip1和Ki67在大肠癌发生及发展中的作用，联合检测Cyclin E、p27kip1和Ki67有助于判断大肠癌的恶性趋势及生物学行为，并判断预后，为大肠癌的个体化治疗提供依据，为临床病人服务，改善病人的预后，为临床实践提供了可靠的、重要的指导意义和现实意义，因此该课题有着广阔的应用前景，具有较好的经济效益和巨大的社会效益。