[00118415]禽流感病毒核酸扩增-荧光检测诊断试剂盒研制开发

主要解决了5个关键的技术问题，其中“绿色”质粒的概念较为新颖：1.利用生物信息学手段，分析获得了禽流感病毒各亚型的基因组序列信息，并选择了禽流感病毒保守的M基因序列，和各个亚型的特异性HA基因序列。2.自主设计了适合于禽流感病毒通用检测(至少高致病性的)、H5、H7、N1和H9各亚型特异性检测的特异TaqMan探针和引物。3.优化调整了引物和探针序列及扩增反应体系，使试剂盒具有较强的鉴别诊断功能，能在同一时间内鉴别出禽流感和新城疫，及禽流感的各亚型包括H5、H7、H9和N1等。4.创新性的构建了用以代替阳性病毒株的质粒，并体外转录成相应的RNA，大大的降低了试验过程中的危险性，提高了实验的可操作性，使试剂盒成为无传染性的绿色试剂。5.自主研发了高效简便的柱抽提核酸的方法，并配以简易装置，大大提高了核酸抽提过程的自动化，减低了抽提过程的人为误差。所有柱抽提原料都已国产化。目前欧洲只有鸟类中有禽流感，但是在亚洲人和鸟类都发生禽流感病毒感染。从2003年以来，为了控制禽流感爆发，8个国家里已经有一亿多鸟类死于禽流感或者被宰杀。控制禽流感爆发的关键是快速、早期、准确地诊断，基因检测技术是检测致病病原体最可靠的方法。仅在中国，为了快速检测动物中的禽流感，检测试剂盒的需求量每年就超过800万至1000万。该项目研制的禽流感病毒检测试剂盒，具有快速、敏感、特异、安全的优势，克服了常规PCR易污染、灵敏度低的缺点，可以用于我国检验检疫系统各直属局，可以快速、准确地做出诊断。这套禽流感快速检测系统将帮助禽及禽肉进出口快速检验检疫，还可用于我国兽医行政主管部门对养禽场抽检了解禽流感疫情，在对受威胁地区可疑病例的快速诊断、我国禽肉产品的安全性检查、推动贸易发展等方面都具有重要的现实意义。