[00118473]猪病毒性、传染性疾病综合诊断与防疫技术推广应用1

(一) 项目来源 本项目为黑龙江省科技厅重点科技示范推广项目。项目编号：TC10B0701;项目执行时间：2010.10-2012.12。项目验收时间：2014.8.29 （二）技术原理及性能指标 本项目主要集成基因组制备技术、cDNA合成技术和PCR技术制备出能够检测猪瘟病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒的三重PCR检测试剂盒。试剂盒稳定性：在-20℃条件下可以稳定保存半年以上;特异性：能够准确地鉴别猪瘟病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒,特异性达90%以上;敏感性：试剂盒对猪瘟病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒检测可以达到基因ng水平。 （三）技术的创造性与先进性 在国内首次开发出用于检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒感染的三重PCR检测试剂盒。该技术可以从基因ng水平对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒进行鉴别诊断。该方法敏感度高,特异性强,适合于疾病的快速诊断。最大特点是能够在同一批次试验中同时检测三种病原,不但可以降低诊断成本,也节省了操作时间,特别是形成试剂盒以后,其操作程序标准化可以降低污染机率进一步缩短工作时间。本产品形成以后为猪繁殖障碍性疾病诊断和进一步的净化计划提供了有力的保障。同时,在试剂盒组装过程中,把试剂盒分成盒体和盒盖,盒体内设有衬垫,衬垫上设有放置诊断试剂药品的容器孔,所述的盒体内部设置有隔板,隔板将盒体内分为低温区域和常温区域,其中,低温区域内壁上套装有保温泡沫板,并且在该区域内装有制冷剂。使得不影响常温区域的药品正常使用的同时又使低温区域的药品处于低温的状态,延长了使用时间,为获得更准确的诊断结果提供了保障。 （四）技术的成熟程度,适用范围和安全性 本项目已经少量装配成多重PCR检测试剂盒,在黑龙江省内10余个规模化猪场和养殖合作社以及大庆市、安达市、肇东市和绥化市等地区的200余个散养户中示范应用,检测样本750多份。应用过程中与国内外同类产品进行比较研究,特异性与单重PCR检测试剂盒特异性符合率100%,与已知样本符和率100%;经改进后的试剂盒最佳退火温度为56.2℃,敏感性达到单重PCR检测水平,稳定性实验结果表明,保存8个月内可以对猪瘟、猪细小病毒病和猪伪狂犬进行有效鉴别诊断。本试剂盒可用于包括种猪在内的各年龄段猪只猪瘟、猪细小病毒病和伪狂犬的诊断,可应用与感染各个阶段。 （五）应用情况及存在的问题 该技术在黑龙江省宝泉岭农垦玉兰牧业有限公司、大庆绿野畜牧有限公司、肇源县肇源镇旺达养殖场、杜尔伯特蒙古族自治县家源养殖有限公司、杜尔伯特蒙古族自治县高家原种猪繁育有限责任公司、大庆市鑫宝养猪有限公司和肇源县肇源镇合鑫养殖合作社等10余家养猪企业或养猪合作社,以及大庆市、安达市、肇东市和绥化市等地区的200余个散养户中推广应用,共计检测繁殖障碍性样本750多份,其他类型病死猪200余例,根据各自诊断结果和发病特点开具处方和防治措施180个,在两年的应用时间里创造直接经济效益1100多万元。但是,对这三重PCR检测试剂盒的组装技术需要进一步熟化,实现规模化、商品化的推广应用。