[00118659]间充质干细胞微泡的标志物特征及功能特性的机制研究及临床应用

间充质干细胞（Mesenchymal stem cell,MSC）是来源于中胚层的多能干细胞,具有自我更新及多向分化能力,目前发现还具有免疫调节和支持造血重建的作用,因而在再生医学、免疫相关疾病治疗和造血干细胞移植后GVHD的防治等方面均具有极为广阔的临床应用前景。但间充质干细胞存在潜在的致瘤风险,且体积相对较大,回输至体内后可能形成栓塞而导致严重的不良反应。因此,如何在保留MSC生物功能的同时,有效规避其风险,是目前研究的热点。近年来,研究者逐渐认识到MSC发挥这些功能可能是依靠其分泌的微泡（Microvesicle,MV）实现的。MVs是一组由多种细胞在病理和生理状态下释放的、大小在50-1000nm之间的异质性膜囊泡,本课题组研究发现MSC在体外培养过程中可释放MVs,且携带母细胞特点的抗原标记及内容物组分,这可能是MSC-MVs发挥作用的重要机制。因此,本项目聚焦MV这种新型的亚细胞器,对MSC-MVs的生物学特性及功能进行基因层次、蛋白层次和细胞层次的研究,以期使其在造血干细胞移植术后GVHD的防治、造血衰竭性疾病的治疗,甚至包括一些自身免疫性疾病的治疗中发挥良好作用。1.不同实验条件（包括抗凝剂、离心速度、离心时间、储存条件）对MVs数量及大小分布的影响,确定高效无损分离提取MVs的最优方法。2.研究MSC在体外培养过程中释放MVs,且携带母细胞特点的抗原标记及内容物组分。3.IFN-γ激活前后MSC来源微泡（MSC-MVs与γMSC-MVs）中miRNA的差异表达,了解MSC-MVs发挥免疫调节作用的可能信号分子、信号通路及分子机制。4.MSC-MVs对脐血造血干祖细胞的增殖水平、集落形成能力、粘附能力及迁移能力的影响,明确MSC-MVs的促造血作用,评估MSC-MVs替代MSC用于移植后促造血重建的可行性。（1）优化MVs收集、储存及分离提取的实验方法。（2）发现MSC在体外培养过程中可释放MVs,且携带母细胞特点的抗原标记及内容物组分。（3）明确MSC可通过MVs发挥免疫调节作用,其机制主要是通过MVs内含的miRNA组群作用于下游信号通路而实现的。（4）MSC-MVs是其母细胞发挥支持造血功能中的关键作用方式,有良好的造血支持活性。 本项目聚焦MV这种新型的亚细胞器,对MSC-MV的生物学特性及功能进行了基因层次、蛋白层次和细胞层次的研究,采用的技术手段也涵盖了细胞生物学、分子生物学、分子免疫学、生物信息学等最新研究方法,具有良好的先进性。技术的成熟程度：本项目的研究成果已先后在上海瑞金医院、同济医院、武汉大学中南医院等十余家省内外大型三甲医院推广应用,取得较好效果,获得一致好评,普遍认为该项目具有较高的应用价值和安全性。说明本项目的相关技术成熟,可以在临床得到广泛应用。 适用范围：异基因造血干细胞移植术后GVHD的防治、脐血造血干细胞移植术后造血重建延迟的治疗、造血衰竭性疾病的治疗,某些自身免疫性疾病的治疗。 安全性：良好。 本项目的研究成果已先后在上海瑞金医院、同济医院、武汉大学中南医院、襄阳市中心医院、武汉市第一医院、武汉市第四医院等十余家省内外大型三甲医院推广应用,取得了良好的临床效果,改善了患者生活质量,缩短了住院天数和恢复时间,减轻了家庭及社会负担,取得了良好的社会效益和经济效益。 无