[00118910]温肾生精饮治疗生精障碍的表观遗传学研究

① 课题来源与背景： 课题来源：吉林省中医药管理局中医药科技项目（2012-165）。 课题背景：目前,复方中药制剂温肾生精饮在临床治疗男性生精障碍已取得了显著的疗效,但其治疗机制和治疗的作用靶点研究的还不是很清楚。研究发现男性不育与精子的表观遗传学改变密切相关。为一进步推广复方中药制剂温肾生精饮其在临床的使用,我们课题组已经利用生精障碍动物模型从睾丸组织形态的改变和超微结构方面阐释了温肾生精饮的治疗作用。形态结构和功能的改变是由基因的表达控制,而基因的表达又受到表观遗传的影响,在DNA序列没有改变的情况下表观遗传学机制精确地调控着基因的表达变化。因此,本课题运用了亚硫酸氢盐修饰后测序法、real time PCR和免疫组织化学等成熟的细胞分子生物学技术,从表观遗传学方面寻找温肾生精饮的治疗靶点,阐明其治疗机制。 ② 技术原理及性能指标 技术原理：本研究采用的复方中药制剂“温肾生精饮”,由15味中药材组成,该方遵循“补肾填精、益气活血”的治疗理论,在临床治疗生精障碍效果显著,现已治愈男性不育患者数百例。为进一步推广其临床应用,探寻其作用靶点和治疗机制,本项目从表观遗传学的角度展开研究,发现温肾生精饮能显著修复环磷酰胺致小鼠睾丸生精功能损伤,显著减少睾丸生精细胞凋亡,精子细胞中组蛋白H3K9二甲基化是其作用于受损睾丸组织的一个重要靶点,其能稳定精子细胞中组蛋白H3K9二甲基化水平,修复受损的睾丸组织,提高雄性的生育能力。 性能指标： （1）已利用环磷酰胺制作了小鼠生精障碍模型; （2）检测了小鼠的体重、生殖器重和附性腺重,发现与模型组和西药组比较,温肾生精饮显著提高了生精障碍小鼠体重的增重、附性腺指数; （3）对小鼠睾丸组织进行HE染色,观察了睾丸生精上皮的发育且进行Johnsen评分,结果显示与模型组和西药组比较,温肾生精饮显著提高了小鼠睾丸组织的Johnsen评分,促进了生精上皮的发育; （4）利用TUNEL法检测睾丸生精细胞的凋亡,发现与模型组和西药组比较,温肾生精饮显著减少了小鼠睾丸组织中凋亡的生精小管数和生精小管内凋亡的阳性细胞数; （5）运用real time RT-PCR技术分析甲基化转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的变化,结果发现DNA甲基化转移酶的mRNA水平没有发生显著改变,说明环磷酰胺不会引起DNA甲基化水平的改变; （6）采用免疫组织化学技术研究睾丸组织中各级生精细胞组蛋白甲基化（H3K4me、H3K9me）的变化,结果发现温肾生精饮显著提高了生精障碍小鼠睾丸精子细胞中组蛋白H3K9二甲基化的表达水平,对组蛋白H3K4的甲基化水平没有显著影响。说明组蛋白H3K9二甲基化是复方中药温肾生精饮治疗生精障碍作用的一个重要靶点。 ③ 技术的创造性与先进性; （1）阐明了温肾生精饮能显著减少睾丸生精细胞凋亡,提高睾丸的生精功能。 （2）从表观遗传学角度,明确了组蛋白H3K9二甲基化是复方中药温肾生精饮治疗生精障碍的一个重要靶点。 ④ 技术的成熟程度,适用范围和安全性 该复方中药制剂目前正处于临床前的研制阶段,需要进一步进行新药的审批,然后才能在临床上推广应用。适用于治疗男性生精障碍。在临床和动物实验上已进行了该制剂安全性的检测,证明该制剂对人是安全的。 ⑤ 应用情况及存在的问题; 该复方中药制剂正处于临床前的研制阶段,需要进一步进行新药的审批,然后才能在临床上推广应用。存在的主要问题是经费短缺。 ⑥ 历年获奖情况; 已在国家重要期刊和核心期刊发表相关论文3篇。