[00118993]通心络胶囊对大鼠肾缺血再灌注损伤肾小管上皮细胞凋亡的作用研究

按随机数字表法将实验动物分组：假手术对照组（S 组）10只,缺血再灌注组（I/R组）10只,缺血再灌注 +通心络胶囊预处理组（I/R+T组）10只,适应性喂养1周,术前自由饮食,其中I/R+T组术前7天连续灌胃,通心络胶囊剂量为（1.0g/kg,2/日）。用3%戊巴比妥50mg/kg腹腔内注射麻醉,取腹正中切口暴露双侧肾脏,游离肾蒂,用无损伤动脉夹同时钳夹大鼠双侧肾蒂,肾脏颜色由红润转为暗红;45分钟后松开动脉夹,肉眼可见肾脏由暗红变为鲜红,表明再灌注成功,缝合切口,自由摄取水和食物。动物模型再灌注24小时后处死,采取标本。取2 ml血清于-20℃保存,比色法测定血清尿素氮（bloodureanitrogen,BUN）水平和肌酐（serum creatinine,Scr）水平;取部分肾组织保存于10%中性甲醛液中,用于HE染色、免疫组织化学（PowerVision,Mtwo-Step免疫组化法）检测肾组织Bax、Bcl-2蛋白的表达、TUNEL方法检测细胞凋亡;部分肾组织分装,用液氮快速冷却后保存于-100℃冰箱用于做肾组织SOD,MDA含量测定。结果如下： 1.大鼠肾功能改变 缺血再灌注导致大鼠肾脏损伤明显,于再灌注24小时IR组血清SCr、BUN较假手术组显著升高,两组间有统计学差异（P＜0.05）;IR+T组,再灌注24小时血清SCr、BUN水平较IR组下降明显（P＜0.05）;三组间有统计学差异（P＜0.05）。 2.大鼠肾组织学改变 （1）大体：假手术组为正常肾组织表现;缺血再灌注组肉眼可见肾皮质较苍白,肾髓质癖血色深暗,TXLC治疗组肾脏外观与正常接近,病理改变减轻。 （2）光镜与假手术组对比,IR组肾小管上皮细胞肿胀,界限不清,出现不同程度的变性与坏死,间质炎性细胞浸润,充血水肿;肾小管管腔扩张,管腔中可见管型。TXLC治疗后肾小管上皮细胞肿胀明显减轻,变性和坏死亦减轻,肾间质无明显改变及炎细胞浸润。 3.免疫组织化学方法检测肾组织Bax、Bcl-2蛋白表达 （1）肾组织Bax蛋白表达 假手术组Bax在肾小管上皮细胞有少量表达;与假手术组相比,缺血再灌注后,Bax在肾小管上皮细胞的表达明显增加（P＜0.05）,以近端小管为主。TXLC治疗组Bax表达则降低,与IR组比较有统计学差异（P＜0.05）。 （2）肾组织Bcl-2蛋白表达 在假手术组肾远曲小管上皮细胞Bcl-2有少量表达,近曲小管上皮细胞表达更少;缺血再灌注后Bcl-2在肾近端小管上皮细胞的表达增加,以近端小管为主,与假手术组比较有显著性差异（P＜0.05）;与IR组相比,TXLC治疗后肾组织Bcl-2表达增加（P＜0.05）。 4.肾组织凋亡细胞的原位标记检测 荧光显微镜下胞核显示绿色荧光者为凋亡细胞。与假手术组相比,IR组大鼠肾组织凋亡细胞明显增多,肾组织中出现大量凋亡小体。TXLC治疗有抑制肾小管上皮细胞凋亡的作用,小管上皮细胞凋亡程度显著减轻,肾组织中很少出现凋亡小体。