[00119207]卵巢上皮性恶性肿瘤患者手术前后外周血Th1/Th2细胞因子表达的研究

课题来源与背景：辅助性T细胞（Th）在机体免疫系统的调节中起重要作用。依据其自身分泌的细胞因子,Th细胞可进一步分为Thl和Th2两个亚群,Thl细胞主要分泌IL -2、IFN-γ和TNF-β等细胞因子,主要通过介导细胞免疫和迟发型超敏反应,对机体产生各种免疫效应;Th2细胞主要分泌IL-4、IL-6和IL-10等细胞因子,主要通过介导体液免疫对机体产生各种免疫效应。正常生理情况下,Th1、Th2两类细胞处于相互抑制、相互转化的平衡状态,一旦平衡被打破,机体就会处于Th1优势或Th2优势的偏移状态,从而出现过敏性变态反应、移植排斥反应、炎症、肿瘤等病理反应。机体的免疫功能与肿瘤的发生发展密切相关,如果机体的免疫功能失衡,肿瘤细胞逃避免疫细胞的监控而发生免疫逃逸,最终产生肿瘤。Gotlicb等发现卵巢癌患者腹水中存在IL-10,遇珑等发现13例卵巢癌患者腹水中IL-10表达的阳性率为84.6%。有研究证明,卵巢癌肿瘤细胞中IL-10的表达明显增强。王建华等认为,IL-6的高表达可能影响卵巢癌细胞之间的粘连结合力及血管形成,进而促进肿瘤的广泛转移,因此,IL-6水平的高低与卵巢癌患者的分期、病程及预后等相关。Kusuda等通过分析40例上皮性卵巢癌预后因素发现,IFN-γ水平和Th1/Th2偏移为晚期卵巢癌的独立预后因素。卵巢癌患者Th1向Th2的偏移,改变了肿瘤的微环境,机体处于免疫抑制状态,癌细胞得以生存并发展。 技术原理及性能指标：采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IFN-γ的浓度。分别收集健康志愿者、患者术前术后卵巢上皮性恶性肿瘤、上皮性良性卵巢肿瘤患者术前一天,术后第七天空腹静脉血3ml,离心3000转/分取上血清,放入液氮管保存,供集中检测。检测时标本加入至已被IFN-γ捕获抗体预包被于酶标板上,其中的IFN-γ会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去;当加入生物素化的抗人IFN-γ抗体后,抗人IFN-γ抗体与IFN-γ接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂,若样本中存在IFN-γ将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,IFN-γ浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中IFN-γ浓度。同样的方法检测IL-4在外周血中样本中的水平。 研究结果：卵巢上皮性恶性肿瘤患者手术前与正常组比较IL-4表达升高,IFN-γ的表达降低,Th1/Th2比值下降（P＜0.001）。卵巢上皮性恶性肿瘤患者手术后与术前比较,IL-4降低,IFN-γ和Th1/Th2比值上升（P＜0.05）。卵巢上皮性恶性肿瘤患者手术后与正常组比较Th1/Th2比值无差异（P＞0.05）。 技术的创造性与先进性：该技术目前比较成熟,但是在卵巢上皮性肿瘤患者检测方面尚属比较新的途径。 技术成熟程度,使用范围及安全性：该技术检测技术成熟,对患者非常安全。 应用情况及存在问题：能够作为妇科卵巢恶性肿瘤患者手术前后外周血中的细胞因子检测后比较患者术后恢复情况。存在问题,可能存在因采血时限的因素影响检测结果。 该成果简介可以向社会公开。