[00119322]微小RNA差异表达在结直肠癌发生和侵袭转移中的作用及临床病理应用

结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是世界范围内的常见消化道恶性肿瘤,我国近年来由于生活水平提高,饮食结构发生改变,结直肠癌特别是结肠癌的发病率呈上升趋势。虽然诊疗技术和手段不断更新,但多数结直肠癌患者在行根治性手术前已出现微转移,高转移率也是导致我国结直肠癌晚期患者多、预后差的主要原因,成为结直肠癌防治的关键环节。 microRNAs（miRNAs）是一类内源性、单链非编码小RNA分子,可与靶mRNA的3’非编码区（3’-UTR）通过配对结合而在转录后水平对基因表达进行负调控。目前已有1300多种miRNA被发现,调节着高达30%的人类蛋白编码基因。miRNA不仅在细胞生长、分化和死亡等生理过程中起作用,还可作为肿瘤抑制基因或癌基因而参与包括结直肠癌在内的多种肿瘤的发生及侵袭转移过程,已成为新近肿瘤领域的研究热点。 本项目采用miRNA转染与敲低、RNA干扰、实时荧光定量PCR、miRNA慢病毒载体稳转细胞筛选和裸鼠异体移植瘤模型构建等国际上miRNA研究的先进技术： （1）从miRNA上调和下调两个角度,采用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室迁移和侵袭实验、免疫荧光和流式细胞实验等,以人结肠癌HCT116 （p53+/+）、HCT116（p53-/-）、RKO、SW480、SW620、HT?29、Lovo和Colo205细胞系为实验对象,确定miR-140、miR-34a和miR-502表达可抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力; （2）通过裸鼠异体移植瘤实验,确定miR-140和miR-502表达可抑制HCT116 （p53+/+）细胞在裸鼠体内的增殖和在肺脏的转移; （3）通过人结直肠癌病理组织实验,确定miR-140、miR-34a和miR-502表达可抑制结直肠癌的发生和侵袭转移;miR-221表达则可促进结直肠癌的发生和侵袭转移。因此,miR-140、miR-34a和miR-502是结直肠癌增殖和侵袭转移的抑制因子,miR-221则与结直肠癌发生和进展有关。miR-140、miR-34a、miR-502和miR-221可作为结直肠癌诊断和治疗的潜在候选靶点。 本项目发挥分子生物学、医学和生物信息学的学科交叉优势,将目前肿瘤研究领域的热点miRNA表达与结直肠癌增殖和侵袭转移行为相结合,系统全面地揭示miR-140、miR-34a、miR-502和miR-221等几种微小RNA在结直肠癌发生、发展中的作用和相关机制,所得结果具有重要的基础理论研究价值和实际临床病理意义。转移是造成结直肠癌患者死亡的主要原因,彻底改善患者预后就要从预防和治疗转移入手。由于miRNA介导的调控具有高效、即时、节能及精确的特点,因此具有单个基因治疗无法比拟的优势,代表了攻克肿瘤的方向,本项目结果将为miRNA治疗结直肠癌提供重要的分子实验基础。此外,与RNA相比,miRNA可在福尔马林固定标本和患者的血液、体液标本中稳定表达,且目前包括荧光定量PCR在内的检测手段使得miRNA的检测方便易行,加之其远远低于DNA的数量,因此,miRNA作为肿瘤标记物,对肿瘤的诊断也将起到十分重要的作用。 目前大连医科大学附属一院根据本项目结果,采用miR-140、miR-34a、miR-502和miR-221等几种微小RNA作为临床结直肠癌侵袭转移辅助诊断指标,得到了预期效果。现正在总结经验,有关这几种微小RNA用于结直肠癌治疗方面的研究也在积极探讨中。 本项目已发表论文18篇,其中SCI收录13篇,影响因子合计43.5,中文核心期刊5篇。获得辽宁省科技进步三等奖一项（2014年11月）,辽宁省自然科学三等奖一项（2015年12月）。培养博士研究生3名,硕士研究生6名。