[00119553]脂肪细胞来源Microparticles介导新生血管生成在2型糖尿病易损斑块形成中的作用

心血管疾病是糖尿病患者最严重的并发症。粥样斑块破裂导致的急性冠脉综合征（ACS）是糖尿病患者心血管事件的主要原因,但糖尿病患者冠状动脉病变严重、易损斑块发生率高的机制尚未完全阐明。本项目应用分子生物学、细胞生物学、病理组织学等技术,以2型糖尿病ApoE-/-小鼠为对象,以内皮细胞为切入点,对脂肪细胞来源exosomes（ADEs）介导的血管新生在糖尿病易损斑块的发生发展中的作用进行了研究,结果显示：⑴差速超速离心法能够提取纯度较高的ADEs;⑵ADEs直径分布、形态、表面特征性marker均符合exosomes一般特征;⑶IRADEs表面富集Shh,而通过腺病毒过表达或干扰脂肪细胞Shh蛋白后,IRADEs上Shh表达会相应增加或减少;⑷小鼠主动脉内皮细胞及小鼠主动脉斑块均能摄取由PKH26标记的ADEs;⑸IRADEs能够明显提高内皮细胞的增殖、迁移及成管能力,促进血管新生;⑹Shh过表达IRADEs促血管新生能力增强,而Shh干扰的IRADEs促血管新生能力降低;⑺Patched蛋白抑制剂—环巴胺,可以抑制IRADEs对内皮细胞功能的促进作用,降低Gli及VEGF-A等下游分子的表达;⑻2型糖尿病ApoE-/-小鼠主动脉粥样硬化斑块为易损斑块;⑼IRADEs显著增加小鼠体内Matrigel基质胶栓和主动脉环出芽实验的血管新生反应,从离体水平证实IRADEs能够促进血管新生反应;⑽尾静脉注射IRA DEs主要通过增加斑块面积、增加斑块内脂质含量、减少斑块内胶原、平滑肌细胞及巨噬细胞含量,增加了易损指数,从而进一步增加了斑块的不稳定性;而敲减Shh分子的IRADEs其加重斑块不稳定性的作用减弱;⑾ 2型糖尿病ApoE-/-小鼠主动脉血管外膜滋养血管 数量明显增多,尾静脉注射IRADEs能够进一步增加血管外膜滋养血管数量,而敲减Shh分子能够减弱IRADEs的促血管外膜滋养血管生长作用;⑿ IRADEs能够促进BMDM与RAW264.7巨噬细胞发生M1型极化,抑制M2型极化; IRADEsshh-及IRADEsshh+介导的巨噬细胞M1型极化分别降低及升高; ⒀ADEs携带的Shh刺激巨噬细胞M1型极化后进一步加重脂肪细胞胰岛素抵抗。结论：ADEs通过其表面携带的Shh介导的血管新生及巨噬细胞M1型极化影响糖尿病动脉粥样硬化斑块易损性。