[00119631]短蛸原生殖细胞的迁移图式及分子基础研究

(1)本项目通过构建了短蛸cDNA文库,利用分子生物学和生物信息学手段进行了EST序列测定和序列分析,获得了包括DDX、PL10和VASA-like在内的生殖相关基因20余条;利用实时定量PCR技术检测了DDX、PL10和VASA-like基因在健康短蛸各个组织中的表达,以及其在短蛸胚胎发育各个阶段的表达。研究发现： ①DDX和VASA-like基因分别在雄性和雌性性腺中表达量最高,而PL10在鳃心中表达量最高; ②DDX基因在受精卵发育的前15天表达量较高,第19-29天表达量低,第33天升高至较高水平; ③PL10基因在前15天表达量低,第19天开始升高,一直到出膜前都保持高水平; ④VASA-like基因在胚胎发育的前9天表达较低,至15天时表达量稍有增加,其后除在第25和33天降低外,一直保持较高的表达量。 （2）本项目采用生物统计学的方法研究了短蛸发育的生物学零度、有效积温、胚胎发育的温度系数和胚胎发育时期与生长积温的相关性,受精卵发育的生物学零度为5.15℃,受精卵发育到初孵幼体的有效积温为589.45℃.d,胚胎发育最适温度范围为19.46～23.06 ℃,胚胎发育阶段所处时期和发育生长积温呈线性函数关系：K = 26.72Ts + 55.34 （R2 = 0.996）。 （3）分析了短蛸体重、胴长、性腺指数和生殖系统参数的周年变化。利用组织学方法研究了短蛸性腺发育过程,确定了短蛸卵巢和精巢形成过程及其发育分期,总结出短蛸性腺发育的周年变化和发育阶段包含的细胞类型;将短蛸的性腺发育过程分成5个阶段,并阐述了每个发育分期的特征。研究结果为短蛸生殖腺的发生、性别决定以及生殖调控等提供了重要的理论依据。