[00119748]适用于注射用硫酸黏菌素的组分及有关物质的结构分析

课题来源及背景：黏菌素为环脂肽类抗菌肽,对革兰氏阴性杆菌有强效杀菌作用,硫酸黏菌素是临床治疗多重耐药革兰阴性杆菌感染的“最后一道防线”。由于黏菌素为发酵产生的混合物,即含有多种结构类似的组分,主要组分为黏菌素E1、E2,欧洲药典9.6版中还规定应对黏菌素黏菌素E1-I、E3、E1-7MOA、E6、E1-Nva、E4、E2-Val、E2-I、2,3-脱氢E1等11种组分和两种杂质（A和B）进行控制。企业在抗菌肽类质量控制过程中,除以上组分和有关物质外,还发现其他较多的组分或有关物质,而仅通过液相色谱中的相对保留时间法不能准确实现对黏菌素的组分确认,也很难对其他未知物进行结构确定。上海市食品药品检验所抗生素室微生物室具有多年的多肽类药物研究经验,建立了多肽类药物结构鉴定和氨基酸确定平台,在多黏菌素、杆菌肽、达托霉素、缩宫素等多肽类药物的结构鉴定和手性中心构型确定等研究方面建立了国内领先的技术方法,可用于抗菌肽类质量控制。 研究目的及意义：采用离线二维液质联用技术对硫酸黏菌素中含量大于0.15%（面积归一化）的组分和杂质进行结构鉴定。本研究将使企业清晰了解黏菌素中各个组分或有关物质,并以此来评价生产工艺的合理性,同时帮助企业建立更加严格的检验标准用于产品质量控制,期望获得改进生产工艺、提高产品质量的效果。 主要论点及论据：本技术建立了适用于注射用硫酸黏菌素中组分及杂质研究的分析方法,即通过液相色谱、液质联用、离线脱盐二维液质联用等方法对硫酸黏菌素中的组分及杂质进行研究,对含量大于0.15%的组分及杂质采用质谱技术进行结构鉴定。本研究中首先参照欧洲药典9.6版中的液相色谱方法（硫酸钠溶液-乙腈体系）对注射用硫酸黏菌素中的已知组分进行定性分析,对含量大于0.15%的26个馏分进行收集,并在硫酸钠溶液-乙腈体系中定位;建立适用于注射用硫酸黏菌素结构分析的HPLC-Q/TOF-MS方法,根据一级、二级质谱数据总结黏菌素结构解析的通用策略,对26个馏分中的组分进行结构分析（离线二维液质联用）,共解析了54个组分或有关物质的结构。 创见与创新：（1）本方法采用离线二维液质联用技术对黏菌素中的54种组分或有关物质进行结构确认,均是与黏菌素E1具有类似结构的组分,是目前确认组分个数最多的研究,丰富了对黏菌素结构的认识,为筛选低毒高效的新型组分奠定了基础;（2）根据一级、二级质谱数据总结黏菌素结构解析的通用策略可以用于其他品种黏菌素组分的结构解析;（3）根据欧洲药典9.6版中的方法对黏菌素组分进行定位,因色谱柱选择不同会产生误判的结果,通过馏分收集、离线二维液质联用可以准确定性组分;（4）本方法为提高硫酸黏菌素的质量标准提供了研究基础。