[00120054]心脏骤停后综合征早期集束化干预的基础与临床研究

本研究受国家自然科学基金青年科学基金项目（批准编号：81601662）;福建省科技创新联合资金项目（批准编号：2016Y9004）;福建省卫生计生中青年骨干人才项目（批准编号：2016-ZQN-1）;福建省自然科学基金计划项目（批准编号：2014J01283,2015J01375）;福建省高层次卫生队伍人才建设项目（批准编号：201105701）;福建省医学科技创新项目（批准编号：2011-CX-3）等共同资助。心脏骤停后综合征导致严重的多器官功能障碍,是直接影响心肺复苏自主循环恢复（ROSC）患者的出院生存率和预后的严重并发症。目前心脏骤停后综合征的确切机制仍不明确,ROSC患者制定如何尽量保留神经功能,控制复苏后顽固性心衰和心律失常,并保证肾脏灌注的“集束化”治疗策略,是急危重症领域面临至关重要的难题。因此,本研究的主要目的是从体内、体外和人群研究等三方面,揭示心脏骤停后综合征的病理生理学机制,为探索多脏器保护的“集束化”干预和治疗方法提供理论依据和临床证据。 本研究在体动物水平建立心脏骤停心肺复苏（CPR）模型,细胞水平建立氧糖剥夺／氧糖恢复（OGD/R）模型,从ROSC后心、脑、肾等重要脏器入手,观察复苏后心、脑、肾脏器功能变化,并以监测氧化应激、细胞凋亡和炎症反应及相应的干预为主要内容和手段。在复苏后心功能方面,检测心肌8-iso-prostaglandinF2α水平反映心肌脂质过氧化;检测线粒体功能、膜电位、凋亡相关蛋白表达及形态学等反映线粒体途径细胞凋亡;检测PDGFD/PDGFR-β信号表达,反映炎症水平及与复苏后心肌胶原增生的关系。进一步心脏保护方面,采用不同吸氧浓度,观察吸氧浓度与心肌8-iso-prostaglandinF2α表达及氧摄取率关系;予CORM-2释放CO,探讨CO对心肌线粒体呼吸和线粒体途径细胞凋亡的影响;采用PDGFR-β抑制剂,探讨其对心肌胶原形成的影响。在复苏后脑功能方面,检测ELISA、免疫荧光、蛋白芯片等反映炎症水平;检测线粒体功能、膜电位、凋亡相关蛋白表达及形态学等反映线粒体途径细胞凋亡;通过侧流暗场（sidestream dark-field,SDF）成像技术检测皮层微循环等反映脑损伤情况。进一步脑保护主要方面：首先,采用目标温度管理,观察亚低温对脑组织炎症因子表达及血脑屏障通透性的影响;观察亚低温与线粒体膜电位损及凋亡相关蛋白表达的关系;评估亚低温对大脑皮层微循环的影响。其次,采用骨髓间充质干细胞移植,观察干细胞对脑组织炎症因子和生长因子表达及脑功能的影响。在复苏后肾功能方面,统计尿量,检测NGAL,creatinine和ATPase活性等肾损伤标志物,检测凋亡指数及凋亡相关蛋白表达,反映肾损伤。进一步肾保护方面,采用参附注射液观察其对上述指标的影响。最后,通过比较心肺复苏ROSC患者与健康人群的心肌损伤指标,即血清缺血修饰蛋白IMA水平,评估 IMA在心脏骤停患者预后的应用价值;通过采用心肺复苏反馈装置对不同人群进行CPR培训,在复苏操作人群中证实复苏质量与预后的关联。本研究比较系统全面地阐明了心脏骤停后综合征心、脑、肾等重要脏器损伤的病理生理学机制,探索了多脏器保护的“集束化”干预和治疗方法。 本研究首次证实：（1）心肌8-iso-prostaglandinF2α水平与心脏舒张功能呈负相关,在CPR过程和ROSC早期予以中等吸氧浓度能减少心肌8-iso-prostaglandinF2α表达,改善氧摄取率和心功能并延长生存时间。（2）低温状态下的球结膜微循环能较好地反映大脑皮层微循环变化,且简易可行,临床上有潜在的重要监测价值。同时亚低温干预后,抑制脑组织促炎症因子释放,促进抗炎因子和神经再生调节因子生成,提出亚低温能改善血脑屏障通透性和脑微循环。（3）VDAC3是线粒体外膜上的温度敏感蛋白,参与了亚低温的脑保护机制。本研究证实,缺血再灌注损伤后,亚低温通过加强神经细胞线粒体外膜VDAC3泛素化水平,从而减少VDAC3表达量,减轻线粒体途径细胞凋亡。（4）ROSC后移植骨髓间充质干细胞通过增加抗炎因子TSG-6转录和表达,减少中性粒细胞弹性蛋白酶和促炎因子表达,从而修复大脑皮层缺血缺氧性损伤。 本项目技术较为成熟,部分研究结果达到国际先进水平。在2014年美国心脏协会年会复苏专场和2015年美国重症医学年会,以大会发言形式交流各一次;在2016年美国心脏协会年会复苏专场以壁报汇报交流形式交流一次,在中华医学会、中国医师协会急诊医学学术会议和福建省医学会急诊医学学术会议上多次交流,并获得优秀论文奖。共发表SCI论文11篇,中华系列期刊9篇,单篇最高影响因子7.422分,总影响因子超过26分;本研究总共被引用120篇次。课题实施期间,申请“一种适用于缺氧-复氧环境的程序性温控孵育器”实用新型专利一项（专利号：ZL 2018 2 2048008.1）。研究结果被省内外10余家三甲医院推广使用,取得良好的社会效益。