[00120172]基于STAT3信号通路研究脾虚湿困型溃疡性结肠炎黏膜损伤机制及健脾化湿法的干预效应

1、项目来源与背景 甘肃省自然科学基金项目,负责人：成映霞,编号：148RJZA082;经费：2.00万元。本项目基于“脾为之卫”理论以及黏膜STAT3信号通路活化与炎症反应的相关性,拟从STAT3信号及其关键分子角度研究脾虚湿困型溃疡性结肠炎（UC）黏膜损伤机制及健脾化湿法的干预效应。 2、研究意义 STAT3信号通路在消化系统肠黏膜功能紊乱过程中具有至关重要的作用,但有关UC病程中肠黏膜微环境STAT3信号通路关键分子表达及其介导相关细胞因子所发挥的作用及健脾化湿法（参苓白术散）的干预效应却少有研究。故本研究以UC脏腑病机规律并结合前期工作,以脾虚湿困型UC大鼠为研究对象,采用qPCR和WB检测STAT3基因蛋白及p-STAT3在UC及IL-6、TGF-β等细胞因子在肠黏膜组织中的表达规律,并应用以健脾化湿法为指导的参苓白术散进行干预,拟从STAT3介导相关细胞因子角度揭示UC发生机制以及参苓白术散对其干预机制。 3、主要论点与论据 本研究采用灌服精炼猪油、饥饱失常饲养结合水中游泳和TNBS/乙醇等方法复制脾虚湿困型UC大鼠模型。以参苓白术散作为脾虚湿困型UC大鼠模型的治疗药物,阳性对照组大鼠采用柳氮磺胺吡啶（SASP）进行干预。以肉眼和显微镜观察各组大鼠结肠粘膜改变并予以评分。采用ELISA检测血清IL-1β、IL-4、IL-6、TGF-β含量;qPCR检测结肠组织中STAT3、p38MAPK、IL-1β、IL-4、Caspase-8基因表达水平;WB法检测结肠组织中STAT3/p-STAT3、p38MAPK、Caspase-8蛋白表达,从基因蛋白水平揭示参苓白术散治疗UC的作机制。 （1）动物一般生存状况：药物治疗组与模型组相比：其生存状况普遍好转,大鼠便质、便次等基本正常,参苓白术散高剂量组和西药组治疗作用最突出。HE染色病理变化特征：治疗后,各药物治疗组样本组织的充血、糜烂、溃疡等病变都有所减轻。 （2）HE染色病理改变结果分析：模型组溃疡病变的恢复状况明显低于其他各组,溃疡面严重者不但面积较大,而且病变累,有肌层肉芽组织、局部纤维组织增生;与空白组比较,其组织损伤评分显著提高;同模型组相比,治疗组模型动物结肠黏膜损伤逐步痊愈,镜下可见炎性细胞浸润减少,以参苓白术散高剂量组疗效最佳,提示参苓白术散和柳氮磺胺吡啶均能够明显减轻实验模型大鼠肠组织局部炎细胞浸润,加速其黏膜细胞修复。 （3）与空白组比较,模型组实验大鼠的一般生命体征表现较空白组差,结肠组织IL-4含量降低,IL-1β、IL-6、TGF-β含量升高;p38MAPK基因和蛋白表达水平升高;STAT3基因和蛋白表达水平升高,p-STAT3蛋白表达水平升高,Caspase-8基因和蛋白表达水平升高,说明脾虚湿困型UC大鼠结肠组织炎症相关细胞因子IL-1β、IL-4、IL-6、TGF-β表达出现失衡,导致结肠组织对炎症的免疫防御功能紊乱。 （4）与模型组比较,参苓白术散中、高剂量组及西药组大鼠结肠组织IL-4含量及基因表达水平升高,IL-1β、IL-6、TGF-β、STAT3、p38MAPK和Caspase-8基因蛋白表达降低,且以参苓白术散高剂量作用较显著,提示参苓白术散的治疗作用可能是通过调节STAT3、p-STAT3、p38MAPK、Caspase-8、IL-4和IL-1β等基因和蛋白正常表达,促进IL-4分泌,抑制IL-1β、IL-6、TGF-β分泌,提高结肠组织对炎症的防御功能,达到抑制结肠组织细胞炎症和局部细胞凋亡发生的作用。 4、创见与创新 本项目基于“脾为之卫”理论以及STAT3信号通路活化与炎症反应的相关性,拟从STAT3信号及其关键分子角度研究脾虚湿困型溃疡性结肠炎（UC）黏膜损伤机制及健脾化湿法的干预效应。 5、社会经济效益,存在的问题; 中医药在UC发作期与缓解期的治疗上取得了较为满意的疗效,尤其是在UC缓解期,中医采用“缓则治其本”的治疗原则,通过健脾化湿、培补脾胃等途径促进UC康复并有效减低其复发率,而且副作用小、远期疗效好等,具有较好的研究开发与推广应用价值,并就其防治分子机制开展深入研究。本研究以UC脏腑病机规律并结合前期工作,以脾虚湿困型UC大鼠为研究对象,从STAT3信号及其关键分子角度研究脾虚湿困型溃疡性结肠炎（UC）黏膜损伤机制及健脾化湿法（参苓白术散）的干预效应,为该方剂的临床应用提供了基础的理论支撑。临床研究表明中药复方治疗溃疡性结肠炎具有明显的优势。大量研究结果证实,中医药对溃疡性结肠炎动物模型疗效肯定,特别是在保护肠黏膜、增强黏膜屏障功能、调节胃肠动力功能及肠黏膜病理变化等方面,显示了中医药治疗溃疡性结肠炎独特的疗效和潜力。但后期实验研究还应充分吸取分子生物学、细胞及分子免疫学等新兴学科的高新技术,以使中医药对溃疡性结肠炎动物实验研究向新的高度和深度发展。 6、历年获奖情况 暂无