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本鉴定成果是将2个江西省科技厅支撑计划项目合并为“生长抑素调控技术对促进畜禽生长作用的研究”进行鉴定。这2个项目为“以减毒沙门氏菌为载体的生长抑素基因疫苗对肉用鸡促生长作用的研究(2007BN14004)”和“GM-CSF与生长抑素共表达基因疫苗对断奶仔猪促生长作用的研究(20112BBF60020)”。 根据动物生长轴的调控原理,采用生长抑素基因疫苗调控畜禽生长激素的分泌,间接提高畜禽血液中内源性生长激素的含量,从而提高畜禽的生长速度,促进畜禽的生长。 首先,研究了以减毒沙门氏菌为载体的生长抑素基因疫苗对肉鸡生产性能和屠宰性能的影响,探讨生长抑素基因疫苗对肉鸡的促生长作用,进而对其作用机制进行研究,研究了GM-CSF与生长抑素融合基因疫苗对小鼠肝脏和肌肉组织GHR、IGF-I mRNA表达的影响,在些基础上,构建GM-CSF与生长抑素共表达基因疫苗,研究GM-CSF对生长抑素基因疫苗的免疫增强作用,并将该产品应用于仔猪的促生长作用。 1、口服生长抑素基因疫苗调控肉鸡生长激素的分泌 运用分子生物学方法,将生长抑素基因疫苗转入减毒沙门氏菌CS022,构建口服的生长抑素基因疫苗重组菌,在检测该基因疫苗的安全性和稳定性后,以8×109 CFU/只、4×109 CFU/只和1×109CFU/只 不同剂量的生长抑素基因疫苗重组菌口服肉用鸡,研究口服重组菌对肉用鸡生长相关生化指标和生产性能的影响,结果表明,口服生长抑素基因疫苗可以提高肉鸡血浆白蛋白的含量,降低肉鸡血浆尿素氮含量,对血浆总蛋白、葡萄糖、游离脂肪酸的含量影响不明显,免疫器官指数有升高趋势,可增加肉鸡血浆GH、T3 浓度,提高生长抑素抗体P/N值,提高肉鸡的屠宰性能、半净膛率、全净膛率和胸肌率,降低胸肌率,在肉质方面,各组之间的差异不明显。另外,可以提高肉鸡的日增重和饲料转化率。 综合各项指标,口服免疫肉用鸡的较适宜剂量为1×109CFU/只。 2、肌肉注射共表达生长抑素基因疫苗调控仔猪生长激素的分泌 (1)构建共表达基因疫苗pIRES-GM-CSF/2SS 采用分子生物学和基因工程方法,以共表达质粒pIRES为载体,将粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和SS基因片段分别克隆到载体的多克隆位点A和多克隆位点B上,构建共表达基因疫苗pIRES-GM-CSF/2SS,通过RT-PCR、Western-blotting和ELISA方法,证实该共表达基因疫苗pIRES-GM-CSF/2SS可同时表达了GM-CSF和SS两种蛋白,而且表达的产物具有生物学活性。 (2)研究共表达基因疫苗对仔猪的促生长作用 选择来源、体重相近的28日龄的杜×长×大断奶仔猪40头随机分为4个组,每组10头,其中A组为对照组,B、C 、D组为试验组、A组肌肉注射生理盐水,试验组分别肌肉注射不同剂量的pIRES-GM-CSF/2SS基因疫苗,免疫剂量分别为0.25 mg、0.5 mg和1.0 mg,检测仔猪的生长抑素抗体水平、仔猪增重和料重比等指标,研究该基因疫苗对仔猪的促生长作用。结果表明:免疫断奶仔猪后,仔猪的死亡率和腹泻率明显下降。抗体水平显著提高,并随着注射剂量的增加,抗体逐步提高。从全期来看,试验组日增重明显提高,比对照组分别提高了6.18 %、5.43 %和12.83 %。饲料转化率也有所改善,比对照组分别提高了9.64 %、7.83 %和3.61 %。 由以上结果可以看出,仔猪的肌肉注射剂量为0.25 mg/头。