[00120620]基于“肠-肝轴”的乌药抗慢性酒精性肝损伤的作用机制研究

国家自然基金青年项目“基于’’肠-肝轴’’的乌药抗慢性酒精性肝损伤的作用机制研究”（81503328）由浙江中医药大学承担。项目的主要目标是明确乌药对慢性酒精性肝损伤的保护作用及机制,阐述乌药调节胃肠道功能和保护酒精性肝损伤作用的相关性;阐明乌药改善肠道通透性及抗炎的作用机制。 酒精性肝病（ALD）是临床常见的肝损伤形式,是全世界范围内严重危害公众健康的常见疾病之一。在我国,随着饮食结构和生活方式的改变,ALD患病率不断增高,成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病,严重威胁我国人民身体健康,加重了社会经济的负担。深入研究ALD的发病机制,从中寻找抗ALD的作用环节和作用靶点,促进抗ALD药物研究,具有重要社会意义。 酒精性肝损伤（ALI）中存在异常的“肠-肝轴”, 已知肠源性内毒素血症（IETM）是导致酒精性肝损伤（ALI）的关键因素,而酒精引发的胃肠道功能紊乱、肠道通透性增加是形成IETM的始动原因。乌药为传统理气中药,对肠道功能具有良好的调节作用和抗ALI作用,但机制不明。本项目旨在明确乌药调节肠道功能与其抗ALI间的相关性,阐述其改善肠道通透性及抗炎作用机制。本项目通过整体动物实验,开展了乌药醇提取物（LREE）抗ALI量效关系研究,发现在0.2~2g/kg剂量范围,乌药改善肠道功能、降低血清炎症因子水平及保护ALI的作用较好。LREE对急、慢性ALI模型大鼠的作用及机制研究发现,LREE能改善模型大鼠血清肝功能指标,改善脂代谢异常,增强抗氧化能力;能调节ALI大鼠血清二胺氧化酶和胃泌素水平,改善肠道通透性;能调节模型大鼠肠道菌群结构,增加Ruminococcus和Lactobacillus比例;上调小肠紧密连接蛋白claudin-1和occludin的表达水平,改善酒精诱导的肠粘膜微绒毛结构损伤;能有效降低模型大鼠血清IL-8、TNF-α等炎性因子水平及门静脉血内毒素水平,减轻肠源性内毒素血症;能下调肝组织TLR4、CD68等蛋白表达水平,改善肝组织病理学改变。LREE对2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的大鼠肠炎模型作用研究结果发现,LREE能降低模型动物肠指数和单位长度肠重,降低肠道病理评分;能增加肠系膜淋巴结T淋巴细胞数,降低Th比例,增加Tc比例,上调FoxP3/Th比值,改善肠道免疫亢进;能抑制结肠组织COX2表达,减轻肠道炎症反应,对TNBS诱导的肠炎具有良好的拮抗作用。体外细胞实验确定了LREE对RAW264.7细胞的IC50、IC5、IC1浓度,发现LREE能有效抑制RAW264.7炎症细胞释放IL-6、MCP-1等炎症因子,拮抗炎症反应;初步确定了LREE对caco-2细胞的浓度范围。 项目的研究,进一步明确了乌药通过改善肠道功能从而拮抗ALI的作用,初步阐明了可能的作用机制;提示“肠-肝轴”可作为酒精性肝病防治的重要切入点。研究结果可赋予中药传统理气功能新的科学内涵,促进乌药防治酒精性肝损伤及肠道疾病相关产品的研发,促进乌药产业的发展。研究结果已发表论文10篇,其中SCI2篇;申请国家发明专利2项;获浙江省医药卫生科技三等奖1项;培养硕士研究生2名。