[00120666]破骨/成骨细胞ephrinB2/EphB4信号耦联中PDZ结构域蛋白质的筛选及其作用研究

破骨细胞和成骨细胞间的ephrinB2/EphB4 双向信号耦联,使破骨细胞被抑制的同时激活成骨细胞,提示了利用破骨细胞促进骨形成以治疗骨疾病、促进骨整合的新思路和新靶点（ephrinB2 下游PDZ 结构域蛋白质）。本项目目的即筛选出破骨细胞中参与ephrinB2/EphB4逆向信号转导的下游PDZ 结构域蛋白,并进行筛选蛋白生物学功能的初步研究。本项目组证实RAW264.7 细胞系可用作研究ephrinB2/EphB4 双向信号耦联的破骨前体细胞模型;证明诱导分化的成熟破骨细胞表达8 种PDZ 结构域蛋白,但生理状况下,仅Dvl2 与ephrinB2固有结合,提示Dvl2 是内源性的ephrinB2/EphB4 逆向信号转导下游PDZ 结构域蛋白;成功构建Dvl2 过表达载体和siRNA 干扰载体,脂质体介导瞬时转染RAW264.7 细胞,同期构建动物种植模型,但体内外实验尚未显示Dvl2 的生物学效应,其原因可能是脂质体介导的瞬时转染效率较低。在今后的长期研究中,利用本项目创新性结果,可以采用药物压力筛选Dvl2 稳定转染细胞株或构建siRNA 病毒载体提高转染效率,继续体内外深入研究,为开发新靶点提供实验依据。