[00121579]一种筛选高含量功能成分石斛培养物的方法

本发明属于生物技术领域,具体涉及一种石斛高含量培养物的筛选方法及用途。本发明提供筛选高含量功能成分石斛培养物的方法和提高石斛组培苗中的多糖和/或石斛碱的方法以及用于实施所述方法的套盒。本发明的方法包括种子预处理步骤,包括用NaCl和/或甘露醇处理无菌石斛种子;种子诱导萌发步骤,包括在含有NaCl和/或甘露醇的诱导培养基中培养种子,使种子萌发后形成原胚体;和种胚愈伤组织的诱导增殖步骤,包括用愈伤组织增殖培养基培养所述原胚体,形成细胞团或愈伤组织,从而获得石斛组培物。本发明的套盒含有用于实施本发明方法的各种培养基。采用本发明方法和套盒,可获得生长健壮、代谢旺盛的组培苗,其主要功能成分多糖和石斛碱含量高于普通组培苗,且可稳定遗传,可作为优良的种苗繁殖来源。 本发明的目的在于提供一种高含量功能成分石斛组培物的筛选方法,通过从种子萌发到芽簇形成长期再生过程中给予生长逆境胁迫,进行连续筛选,最终可以获得一批生长健壮、代谢旺盛的组培苗,其主要功能成分多糖和石斛碱含量高于普通组培苗,且可稳定遗传,作为优良的种苗繁殖来源。 本发明的另一个目的是通过安全有效的方式稳定提高石斛组培苗中的功能成分含量,大大提高石斛组培苗的药用或食用价值,在完全人工可控的环境下生产无菌苗,直接用于生产鲜加工产品。 本发明方法可通过以下方式实现：收集石斛成熟蒴果,获得大量种子进行无菌萌发,获得的原球茎细胞团进行振荡培养增殖,增殖的细胞或细胞团诱导芽簇分化,在上述从种子萌发到芽簇分化的过程中,始终加以一定浓度的盐分（NaCl）、甘露醇、低氮等逆境胁迫筛选,最终获得的芽簇在去除筛选压的分化培养基上促其分化成芽簇群,跟踪检测芽簇的石斛多糖和石斛碱含量,获得有效成分含量高、继代稳定性好的石斛组培苗。