[00122177]通关藤抗肿瘤活性物质基础及作用机制研究

通关藤是萝藦科植物,以其单味中药制成的消癌平系列制剂临床用于治疗肝癌、胃癌等各种晚期恶性肿瘤,疗效显著。前期工作及文献调研证实通关藤粗提取物通过多种途径体现抗肿瘤活性,其中通关藤苷L-P对肿瘤细胞具有抑制作用。但通关藤表现肿瘤抑制作用的物质基础是某一单体成分,还是以某一类成分为代表的组分群构成的有效部位尚不明确,各有效部位的起效物质均通过同一途径还是多种途径体现抗肿瘤作用尚不清楚。我们根据不同有效成分的理化性质对提取物的各部分进行细化,获得不同成分含量的组分群,采用体外结合在体实验对指纹特征峰与药效进行关联并确认主要活性物质。通过本项目的研究旨在明确通关藤的起效物质,找到通关藤各有效部位引起肿瘤细胞凋亡,达到肿瘤治疗目的的作用机制,为进一步研究该药物体内作用机制提供前期基础。 通关藤不同萃取物对人胃癌细胞SGC-7901,人肝癌细胞HepG2有一定的抑制作用,且与浓度存在相关性,通关藤萃取物作用于肝癌细胞后,细胞由长梭状变成了不规则球形,细胞核偏向一侧,数目也有变化,作用后细胞的贴壁性变差,并在周围可见大量的细胞碎片。采用了S180,H22,EAC三种肿瘤细胞复制在体肿瘤模型,以顺铂注射液作为阳性对照,结果表明通关藤总皂苷组对S180, H22均具有抑制作用,能够有效延长EAC小鼠的生存时间,并能明显增加荷瘤小鼠脏器指数和体重。通关藤总皂苷能够抑制肿瘤相关蛋白的表达,即抑制Bcl-2蛋白表达,促进p53蛋白的表达;同时能够明显促进TNF-α的分泌。谱效关联采用相关系数分析,发现通关藤总皂苷是抗肿瘤活性部位。通过对通关藤总皂苷的化学成分分析,通关藤总皂苷化学成分分析得到10个化合物,对其含量较高且抗肿瘤贡献较大的5个进行结构解析,分别为通关藤苷A,牛奶菜苷K, 11α-O-顺芷酰基-12β-O-乙酰基-通关藤苷元B,通关藤苷G,和异通关藤苷A。其中异通关藤苷A为新化合物。因此,将此类成分作为肿瘤治疗创新药物进行研究,具有广泛的开发应用前景,本实验可以更好地指导通关藤药材在肿瘤治疗方面的临床应用。 项目研究进展期间,撰写学术论文三篇,“通关藤总皂苷提取工艺及抗肿瘤活性研究”,山西中医学院学报已录用;“HPLC法测通关藤药材中通关藤苷G含量”,医药导报已录用;“通关藤总皂苷对HepG2细胞的抗肿瘤作用及其机制研究”,中国中药杂志审稿中。申请发明专利“一种通关藤总皂苷提取物及其提取方法” 1项,授权号：ZL201510985376.7;培养山西省中医药大学2016届本科毕业生1名。项目研究成果为阐释通关藤多成分、多靶点、多途径产生抑瘤作用的功效物质基础提供科学依据,从有效成分方面完善中药质量评价与保障体系,为下一步指导企业对以通关藤为主要成分的制剂消癌平进行提取纯化应用于工业化生产及其质量标准的制定奠定了理论基础,也为指导临床用药安全性具有实际意义。