[00122428]一种检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的胶体金免疫层析速测卡

课题来源与背景： 国家自然科学基金青年基金项目：基于核糖体RNA高通量测序研究转Bt基因棉花对根际土壤微生物群落结构的影响。 目前,将现有的免疫胶体金技术应用到检测转基因产品的外源CPTI蛋白中,仍然存在许多问题,例如,特异性差,灵敏度不高,成本高,因此,亟需对现有免疫胶体金技术进行改进,研制特异性强,灵敏度高、稳定性好、重复性好的检测转基因产品外源蛋白的新方法。 目前,国内外尚未研制出针对转CpTI基因抗虫植物的可以检测CpTI的胶体金免疫层析的快速检测方法。 技术原理及性能指标： 胶体金免疫层析检测法（Immune colloidal gold technique）,也是基于抗原抗体的特异性结合的三明治夹心式技术原理,标记的抗原-抗体复合物侧向移动,直至与固定在表面上的另一种抗体结合显色,与ELISA法不同之处是,以硝酸纤维素膜代替聚苯乙烯反应板为固相载体。在整个检测设备中只包括所需的试剂,没有仪器的要求,整个操作过程相对简单。与核酸和ELISA检测方法相比,该方法对样品的处理比较简单。待检目的蛋白一般是对抗体高度特异的水溶性蛋白,因此,样品不需要复杂的纯化操作,就能进行检测。 本专利产品的目的在于提供一种检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的胶体金免疫层析速测卡,用该速测卡检测豇豆胰蛋白酶抑制剂,特异性强,灵敏度高,并且,操作快速、简便,检测过程无需专门仪器和熟练技能,适用于转基因产品中CpTI的现场快速检测以及安全性评价。 本专利产品特异性强,灵敏度高,稳定性和重复性好,对CpTI蛋白的特异性的检出限为lμg/mL,在室温下放置30天后仍能特异性的检出CpTI蛋白;抗体的最佳标金量低,可以显著降低速测卡制作成本。 技术的创造性与先进性： 本专利产品中,检测线和质控线的间隔增大,避免出现交叉反应和污染,更好的进行CpTI蛋白测定和速测卡本身性能测试。 本专利产品操作方法简便、快速,检测时间短,无需专门仪器和熟练技能,经济便捷,将待测样品滴入加样区内,5-10分钟内即可从观察区观察到结果,特别适用于田间和现场样品的检测。 技术的成熟程度,适用范围及安全性： 本专利产品操作方法简便、快速,检测时间短,无需专门仪器和熟练技能,经济便捷,将待测样品滴入加样区内,5-10分钟内即可从观察区观察到结果,特别适用于田间和现场样品的检测。 应用情况及存在的问题： 目前已在农业农村部生态环境安全监督检验测试中心（上海）和上海出入境检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中心等实验室应用。