[00123372]一种伤寒Vi多糖纯化工艺

伤寒是由伤寒杆菌引起的经消化道传播的严重急性传染病,在发展中国家为常见肠道传染病,尤其在学龄儿童中发病率较高。自19世纪末首次应用伤寒菌体菌苗预防伤寒以来,各国先后研制出 10余种伤寒菌苗,其中的多数,由于免疫效果差或副作用大而被淘汰或被限制使用。1984年,美国国立卫生研究院Robbins等在对伤寒杆菌Vi抗原的保护性进行了重新评估后,通过改进提纯方法,采用提纯的Vi荚膜多糖制备了新一代Vi多糖疫苗。目前,只有Vi多糖疫苗和 Ty21a口服减毒活疫苗是安全、有效的,并被 WHO推荐使用。伤寒Vi荚膜多糖作为疫苗的抗原成分,药典要求用于制备疫苗的多糖核酸含量需低于2%,蛋白含量需低于1%。在去除核酸过程中,乙醇浓度过低会导致核酸残留过多,乙醇浓度过高则会使多糖被沉淀而影响多糖收率。经多次试验并结合原液蛋白核酸含量、O－乙酰基含量、分子大小和多糖收率等指标确定了本方法：将去核酸的乙醇浓度从25%提高到30%,可使核酸及蛋白杂质部分以沉淀析出,离心去除部分沉淀后,上清液再经K700滤板和EKS滤板过滤后,核酸含量进一步降低,同时蛋白含量也降至限值以下。 本专利中,伤寒Vi多糖的纯化方法可取代原有工艺中的苯酚抽提步骤,去除多糖内的核酸蛋白杂质,与原有工艺相比还具有安全、环保、高效和方便快捷等优点,是武汉生物制品研究所有限责任公司独立研发,具有自主知识产权。与原有工艺相比,新方法具有以下优点： 安全：可大大降低受试者和工作人员因苯酚收到伤害的风险,工艺和产品的安全性更高; 环保：大大降低了环境污染风险,符合绿色环保发展的大趋势; 高效：本方法制备的多糖原液的核酸蛋白含量更低,收率更高,在分子大小和O－乙酰基含量方面两种工艺相当,本方法在不影响多糖免疫原性的同时还使其产品质量得到提高。取代苯酚抽提蛋白后,避免了酚提时抽取上清时分层处的多糖损失,多糖收获率也得到提高。 方便快捷：同时简化了工艺,缩短了工艺周期,节省物料使用及人员配备,可降低生产成本。 因不需苯酚的使用,在环保方面,还降低了环境污染风险及人员伤害风险。我们认为新纯化工艺具有独创性和可行性,可应用于伤寒Vi多糖疫苗的规模化生产。本专利方法不仅应用于伤寒Vi多糖的纯化,同时还可对其它类型多糖的纯化工艺提供启发和借鉴作用,为后续的进一步工艺提升和优化奠定了良好的基础。伤寒Vi多糖疫苗新型制备工艺的实施,由于避免苯酚的使用,使产品对人体更安全,大大减少了环境污染;同时避免对生产人员身体健康造成不利影响。生产工艺的技术创新,进一步提高了该产品的产量、质量、疗效和安全性,降低能源消耗、废物排放及生产成本,作到环境友好生产,为重大疾病防治提供质优、价廉的药品,为应对传染疾病疫情突发做好了充分准备,为人民生命健康提供有力保障。此外,本专利方法经改进调整后可应用于其它多糖的纯化,将使多糖纯化工艺更加安全、环保、高效和方便快捷,将对行业内的多糖纯化工艺改进产生积极影响和深刻变革。