[00124556]妊娠滋养细胞疾病的发病机制及其诊治策略的研究及应用

妊娠滋养细胞疾病涵盖葡萄胎,侵蚀性葡萄胎、绒毛膜上皮癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤、上皮样滋养细胞肿瘤,后四种为妊娠滋养细胞肿瘤。妊娠滋养细胞疾病亚洲尤其是中国是高发区,而浙江沿海又是中国妊娠滋养细胞疾病发病率最高的区域。妊娠滋养细胞疾病由于不良妊娠结局及其恶性肿瘤极大的危害人类的身心健康。葡萄胎是一种异常的人类妊娠,表现为胚胎发育受到抑制,异常的滋养细胞增殖为特征。根据组织病理形态分为完全性葡萄胎和部分葡萄胎。CHM是孤雄来源,只含有父系基因组。部分葡萄胎是双亲的,通常的基因组是三倍体核型;相当罕见的二倍体双亲来源的完全性葡萄胎（单雌和单雄基因组）,通常表现家族群聚性。葡萄胎尤其是完全性葡萄胎具有较高的发展成妊娠滋养细胞肿瘤的风险,15-24％的完全性葡萄胎病例可发展为侵袭性葡萄胎,葡萄胎发展为绒毛膜癌的风险比正常妊娠和流产高2,000-4,000倍。本项目在以下方面取得了一些原创性的研究结果： （一）中国汉人妊娠滋养滋养细胞疾病流行病学调查研究：联合7省143所医院对1991-2000年间360余万次妊娠中妊娠滋养滋养细胞疾病的发病情况进行调查,发现我国妊娠滋养滋养细胞疾病的发生率呈下降趋势,但较欧美国家相比仍较高,20-34岁的生育年龄妇女站85%;联合7所医学院附属医院对2010-2014年35万余正常和异常妊娠作了回顾性地分析,其中对妊娠滋养滋养细胞疾病/妊娠滋养滋养细胞肿瘤的发病情况也做了详细地分析,发现其发病率近年有下降趋势,此论文获2017年中华医学会百篇优秀论文奖。 （二）中国汉人家族性复发性葡萄胎及复发性葡萄胎的病因学研究及分子遗传学研究： 1. 建立了国内妊娠滋养细胞疾病最多的生物样本库：从2003 年起建立了葡萄胎的标本库及患者的信息资源库,已收集葡萄胎患者外周血标本1000 例,人娠滋养细胞肿瘤400例,新鲜冻存葡萄胎组织150例,复发性葡萄胎患者外周血标本100例（其中家族性复发性葡萄胎4个家系）,对于葡萄胎遗传背景的研究得天独厚;每年新增葡萄胎约60余例。 2. 葡萄胎的基因分型：通过病理大体形态学分析,免疫组织化学,检测微卫星序列多态性位点鉴别完全性葡萄胎的亲代来源。中华妇产科杂志,42（7）:468-71; 3.对家族性复发性葡萄胎和复发性葡萄胎的分子机制的研究：获得国家自然科学基金,浙江省自然科学基金和浙江省重大专项重点国际科技合作合作研究项目资助支撑对家族性复发性葡萄胎和复发性葡萄胎的分子机制的研究。并与国际上葡萄胎研究处于领先地位的加拿大麦吉儿大学学者展开合作研究10余年,在中国汉人家族性复发性葡萄胎及复发性葡萄胎的病因学研究及分子遗传学研究领域均取得了一些的成果并指导临床实践。对80例中国汉人复发性葡萄胎患者进行NLPR7基因和C6orf221基因突变筛选：本课题组已对80例中国汉人复发性葡萄胎患者及300例无不良生育结局的已育妇女通过测序及比对分析筛选中国人种复发性葡萄胎患者有无NLRP7基因及C60rf221基因突变;1)两个家族性复发性葡萄胎家系中4例复发性葡萄胎患者均存在NLRP7基因双位点突变,且均为杂合性突变,其中一个家族性复发性葡萄胎患者的兄弟NLRP7 上同时存在两个位点的突变,但其有正常的生育结局,国际上首次提出男性NLRP突变时不改变生育结局;2)12例散发性复发性葡萄胎患者存在NLRP7基因双位点突变,其中5例为纯合子突变,突变多发生在LRR区域和NACHT结构域,NLRP7基因双位点突变患者均无正常生育结局;5例散发性复发性葡萄胎患者存在NLRP7基因单位点突变,在中国汉人复发性葡萄胎患者中NLRP7基因突变率26.22%。;3)共有17个NLRP7基因不同位点的突变,终止子突变、重排、插入、接合位点突变和错义突变,并新发现了两个患者大片段的缺失,但在人种匹配的对照组中未发现突变和变异。另59例中国人种复发性葡萄胎患者未检测到NLRP7基因及C60rf221基因的突变。4)通过体外胚胎培养发现2例NLRP7突变患者的合子后的早期卵裂异常,并且发现NLRP7基因突变可在双亲来源完全性葡萄胎,二倍体的父系来源的完全性葡萄胎,三倍体的部分性葡萄胎及四倍体胚胎患者中出现,首次报道葡萄胎致病相关基因突变会导致不同遗传背景的葡萄胎。5)C60rf221基因在中国汉人葡萄胎发生中的作用：80 例中国人种复发性生育结局不良患者（至少一次葡萄胎）及70 例散发性葡萄胎患者70 例和100 例有一健康孩子无不良生育史的中国妇女进行C60rf221 基因基因的突变筛选,未发现任何C60rf221 基因突变变异。中国汉人葡萄胎有其独特的发生机制,COFFO1不是中国汉人复发性葡萄胎的致病相关基因,NLRP7突变率及纯合子远低于印度和巴基斯坦人。 （三）转化研究：国家发明专利1项;基础研究临床转化并指导临床实践。对于复发性葡萄胎患者,区分根据不同的遗传背景,分层治疗,辅助生育技术干预,达到较好的生育结局。六例NLRP7基因双位点突变的患者接受ISCI+PGD辅助生育技术后均未成功妊娠,赠卵后三例获得好的生育结局,而两例NLRP7基因单位点突变的患者接受辅助生育技术后其中一例已孕六个月,非遗传相关的复发性葡萄胎患者,辅助生育技术不改变正常生育结局。发明专利：本发明公开了一种用于检测中国人种葡萄胎易感人群的基因芯片,本发明用于检测中国人种葡萄胎易感人群的基因芯片构建了筛查中国人种葡萄胎各相关基因多态性高危人群的基因芯片检测系统,可快速、准确检测临床样本中的中国人种葡萄胎各相关SNPs,通量大、灵敏度高,对于中国人种葡萄胎的临床诊断和高危人群早期筛查、早期预防干预有重要的意义,可广泛用于临床高效筛查中国人种葡萄胎高危人群。 （四）对葡萄胎恶变进行了系统的阐述,从流行病学的高危因素甄别、葡萄胎恶变机制相关基础研究、临床诊断标准和组织学诊断标准建立以及恶变的预防,建立了人绒毛膜癌的研究模型,分析生物学行为,对葡萄胎和绒毛膜癌的基因表达谱改变进行了研究,筛选了有特色的诊断分子标记物和临床相关诊治流程,葡萄胎恶变治疗效果达到国际领先水平。 （五）对妊娠滋养细胞疾病中罕见的类型建立起自己独到的诊治流程：回顾性分析罕见病例,妊娠合并滋养细胞疾病临床表现以及妊娠结局;上皮样滋养细胞肿瘤的临床和治疗体会以及超声血流特点等,分析了保留生育功能在其治疗中的可能性。双胎之一完全性葡萄胎的诊断治疗及随访,对基层医院起到很好的示范效果。