[00125734]用适配子从结核分枝杆菌基因组表达文库中筛选表面毒力蛋白

结核分枝杆菌（Mycobacterium Tuberculosis）简称为结核杆菌（tubercle bacilli）,它是感染人体导致的结核病是一种严重危害人民身体健康的慢性传染病,结核病是历史上患病率及死亡率最高的疾病之一。本课题通过一系列实验,拟先构建基因组表达文库,再构建原核表达载体,采用酶切结核杆菌基因组以及质粒pET28a,利用同尾酶特性将产物回收,连接转化,构建原核表达载体,将阳性克隆子收集保存。其次通过PCR扩增生物素化的适配子NK2,得到大量生物素化的目的片段。之后应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）发现与适配子特异性结合的蛋白,DAB显色后发现特异性结合条带。最后将筛选出的克隆子测序,分析其生物学功能,得到阳性克隆子的序列后,将其录入Genebank,对比国内外文献已经报道过的结核杆菌致病序列,找出结核杆菌H37Rv可能的表面毒力蛋白,以此毒力蛋白为靶点,研发新的疫苗及诊断试剂,为进一步揭示结核杆菌致病机制奠定基础。 本课题立足于基础研究,筛选出了两种具有特异性结合能力的蛋白成分,通过进一步对两种表面毒力蛋白的研究,揭示结核杆菌致病机制,同时可以将适配子开发成为小分子快速检测结核杆菌试剂盒投入临床使用,为结核病的快速诊断提供一种新的方法。 由于结核杆菌基因组庞大,菌体成分复杂,至今尚未研制成功比卡介苗更好的疫苗,其原因是没有找到BCG与毒力结核杆菌菌株之间的关键性抗原成分差别。毒力结核杆菌可以逃避吞噬,在巨噬细胞内生存,因此可以肯定其菌体表面存在特殊的抗原成分以实现免疫逃避,找到这些成分可以大大增强卡介苗免疫效果。本课题正是利用经过筛选所得到的适配子作为探针,从结核杆菌基因组文库中调出特异性抗原成分,可为研制新型疫苗提供抗原靶点。