[00126737]一种黄独愈伤快速繁殖方法

成 果 简 介 1 课题来源与背景本专利由广西壮族自治区药用植物园承担,是在广西药用资源保护与遗传改良重点实验室经费资助下完成的。薯蓣科薯蓣属植物黄独药用块茎,主要用于甲状腺疾病和癌症治疗。生产上主要利用零余子进行无性繁殖,零余子冬季休眠长期无性繁殖致使种性退化,产量品质下降,利用愈伤组织成苗可解决黄独种苗紧缺的问题,但未见有利用牛肉浸膏等动物组织培养基等更优化的培养报道。 2 技术原理及性能指标本发明技术原理是：将外植体消毒以后,诱导培养得到愈伤组织,再分化丛生芽,壮苗培养、生根培养,炼苗和移栽。具体步骤和性能指标如下：（1）先使用愈伤诱导培养基培养外植体,得到愈伤组织;再使用MS繁殖培养基对进行愈伤组织分化培养,得到丛生芽;然后使用MS壮苗培养基进行丛生芽壮苗培养,得到健壮植株;再使用MS生根培养基进一步生根培养得到完整植株,黄独幼苗炼苗和移栽;愈伤诱导培养基为：牛肉浸膏｜4-6 g/L+TDZ｜1.0-2.0 mg/L+NAA｜0.5-1.0 mg/L+蔗糖｜25-30 g/L+琼脂｜4.5-5.0 g/L;MS繁殖培养基为：MS+牛肉浸膏｜4-6 g/L+KT｜0.1-0.4 mg/L +6-BA｜1.0-2.0 mg/L+IBA｜0.2-1.0 mg/L+GA3｜1-5 g/L +蔗糖｜25-30 g/L+琼脂｜4.5-5.0 g/L;MS壮苗培养基为：MS+牛肉浸膏｜4-6 g/L+6-BA｜0.5-1.5 mg/L +KT｜0.1-0.4 mg/L+IAA｜0.2-0.6 mg/L+蔗糖｜25-30 g/L+琼脂｜4.5-5.0 g/L;MS生根培养基为：MS+牛肉浸膏｜4-6 g/L+NAA｜1.0-2.0 mg/L+IBA｜0.5-1.0 mg/L+蔗糖｜15-30 g/L+琼脂｜4.5-5.0 g/L。（2）如权利要求（1）所述的黄独愈伤成苗快速繁殖方法,其特征在于：① 愈伤组织诱导培养的方法为,将无菌试管苗剪切成段接种到愈伤诱导培养基中,23-26℃,光强1400-2000lux,光照时间10-12小时/天,培养24-25天,得到愈伤组织;或者,② 愈伤组织分化培养方法为,将愈伤组织接种到MS1中,23-26℃,光强1400-2000 lux,光照时间10-12小时/天,培养29-30天,至侧芽分化后获得丛生芽;或者,③ 丛生芽壮苗培养方法为,将所得的丛生芽置于MS2中,23-26℃,光强1400-2000 lux,光照时间10-12小时/天,培养19-20天,得到健壮植株;或者,④ 植株生根培养步骤包括,将所得的健壮植株置于MS3中,23-26℃,光强1400-2000 lux,光照时间10-12小时/天,培养39-40天,得到带根的完整植株;或者,⑤ 如前述的黄独愈伤成苗快速繁殖方法,炼苗和移栽包括下述步骤,即先将植株在22-25℃下,使用水炼苗2-4天,表面角质形成后取出,再将所得苗株移栽到通风良好且光强500-2000 lux的沙土壤中培养30-50天后,得到小树,然后,将所得小树移栽大田,移栽后一个星期内,每天喷雾3-5次,每次10min;一星期后每天喷雾1-2次,每次10min;移栽时的温度20-28℃,相对湿度75-80％,遮阳率65-75％;或者,⑥ 上面所述各培养基的初始pH均为5-6。 3 技术的创造性与先进性本发明除了优化在黄独愈伤组织成苗繁殖不同阶段常规激素和植物培养基外,创造性加入适量的牛肉浸膏,能够促进愈伤组织的生长,使丛生芽生长得更快更好,达到最终提高黄独种苗的繁殖系数和种苗质量,实现规模化生产,满足生产上的需要的效果。 4 技术的成熟程度、适用范围和安全性通过了多次重复试验,技术上已达到成熟,黄独的繁殖效率得到显著提高。适用于普通植物组织培养室的植物大规模繁殖,可快速获得大量优质黄独种苗。本专利涉及的组织培养用营养液为常规药品,仅消毒用升汞为剧毒物质,但按室验管理要求操作不会造成污染,可保证大气、土壤、水分等的安全。 5 应用情况及存在的问题本专利在广西壮族自治区药用植物园的黄独组织培养快速繁殖中得到有效利用。不存在黄独快速繁殖的技术问题,可进行种苗规模化生产和产业化推广,但通过愈伤组织分化成苗过程中可能会产生少量变异种质。 6 历年获奖情况本成果为授权发明专利,暂未获得任何奖项。 7 成果简介本发明提供一种黄独愈伤成苗快速繁殖方法,包括：使用愈伤诱导培养基进行黄独愈伤组织诱导培养,得到愈伤组织;使用MS繁殖培养基对所得的愈伤组织进行愈伤组织分化培养,得到丛生芽;使用MS壮苗培养基中对所得的丛生芽进行丛生芽壮苗培养,得到健壮植株;使用MS生根培养基对所得的健壮植株进行植株生根培养最终得到完整植株,实现黄独幼苗的炼苗和移栽。本发明提高了愈伤组织分化速度,提高了丛生芽的生长速度,提高了生根率。本发明所述的快速繁殖方法,得到的单芽增殖系数达到30-50倍,获得的组培苗生根率在95％以上,每株平均带5-8个根,根长为3-5厘米,移栽沙床成活率在98％以上。